[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
엘앤씨바이오
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 393  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 transfer O/N할때 전류와 전압
앞다리oneday(대학원생)  | 08.12 01:11

지금까지 70kDa이하의 단백질들만 웨스턴을 하였는데 이번에 처음으로 80~90대와 130kDa 사이즈의 단백질들을 웨스턴 하게 되었습니다.

교수님께서 separating gel 조성도 8%정도 해야하며 트랜스퍼도 4도에서 overnight해야 트랜스퍼 된다고 하시는데

저희 실험실에서 보통 트랜스퍼할때 통외부를 얼음으로 감싸고 20%메탄올첨가된 트랜스퍼버퍼를 붓고 안에 아이스팩도 넣고 실온에서 100v, 0.4A , 1시간 30분을 해주고 있습니다.

트랜스퍼를 4도에서 O/N을하게되면 전압과 전류는 어느정도로 해야하며 O/N을 16시간으로 생각하면될까요? 

그리고 4도에서 하면 통안에 아이스팩 넣지않아도 되나요?

알려주세요ㅜㅜ 부탁드립니다.

#transfer
 
#overnight
 
#western blot
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
..  |  08.12 08:50   

사이즈가 크다고 4도 O/N으로 transfer 해야 하진 않습니다.

하던대로 하면 되고 transfer 여부는 마커로 확인해서 덜 되었으면 시간을 좀 늘리면 됩니다.

뒷다리궁그미새싹  |  08.12 09:06  

130kDa이면 overnight안해줘도 실온에서 하던 조건대로 100V, 1시간 30분이면 충~~분합니다. 

-_-  |  08.12 09:21   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

딱히 오버나잇 안 해도 트랜스퍼 잘 되긴 하는데 만약 하신다면

전압을 30볼트 정도로 낮추고 콜드룸이나 냉장고에서 하시면 되고

통 안에 아이스팩은 어느 온도에서 트랜스퍼하든 그냥 넣었습니다.

18-24시간 정도 냅뒀던 거 같네요.

앞다리oneday  |  08.12 12:59  

전압 30V에 전류는 동일하게 0.4A로 16시간 해도되나요?

교수님께서 overnight해야된다고 하셔서 O/N해야하는지 알았습니다.ㅜㅜ 

-_-  |  08.12 13:12   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

일단은 뭐 교수님이 시키는 대로 해보세요 ㅋㅋ

30V에 100mA~120mA? 정도였던 거 같네요 제 기억엔.

어차피 전원공급장치는 둘 중 하나만 고정해서 진행하니...

16시간이면 전날 17시에 세팅해놓고 퇴근해서 다음날 9시에 체크하시면 될 거에요.

kda가 작으면 필터페이퍼로 오버블롯될 수도 있지만 큰 거는 잘 될 겁니다.

제대로 계산하려면 젤 단위면적 당 전류량(mA / cm2)을 구해서 원하는 프로틴 크기랑

맞춰봐야 하긴 하는데 일단은 저렇게 돌려보셔도 100kda 이상 잡는 건 될 거에요.

..  |  08.12 14:56   

연구자들의 아이러니죠

새로운 기술을 연구하지만

정작 새로운 기술에는 보수적인 집단입니다.

앞다리oneday  |  08.12 15:01  

84, 91kDa 프로테인도 O/N 조건으로 트랜스퍼 해도 될까요?

O/N으로 하면 오버블롯되나요?

-_-  |  08.12 15:40   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

오버블롯이 걱정되시면 25V에 50~80mA 정도로 더 낮춰서 해보시던가요.

제 기억 상 80-90kda 정도도 30V 정도로 오버나잇 했을 때 오버블롯 심하지 않게

트랜스퍼 잘 됐던 거 같습니다. 연구노트 두고 나와서 좀 찾아봐야겠지만...

앞다리oneday  |  08.12 16:32  

넵 감사합니다!!!!

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN 한국공인대리점] TECAN Microplate reader/ IMPLEN Nanophotomet.. (12.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
양손에 들어오는 작은 강력함 MIC qPCR cycler
JW크레아젠 JW크레아젠
JW크레아젠 Thermo 기초장비 Event! (10.23까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
3D CellCulture CO2 incubator CLINOSTAR 20% 할인행사!
대일랩서비스 대일랩서비스
Thermo Scientific 재고 한정 이벤트 최대 25%! (Co2 Incubator, Locator,.. (12.1까지)
나노팬텍 나노팬텍
3차원 세포배양용기를 사용하여 기존 2차원 세포배양의 한계를 극복해보세요! (11.30까지)
최근등록   더보기 >
3T3L1 분양 가능하신분 계실까요.. [부산 양산 김해 경남 창원]   09.25
Autophagy는 질병에 있어서 좋은건가요 나쁜건가요?   09.25
e.coli의 transformation   09.25
혈중 알콜 농도 측정 관련   09.24
soil DNA extraction이 안됩니다...   09.24
NGS targeted sequence분석을 하는 기업이 있을까요?   09.24
glucose 농도별 미생물 성장률   09.24
cell culture에 HEPES가 꼭 필요한가요?   09.24
Microplate Reader 관련 질문입니다.   09.24
western blot band shape에 대해서 여쭤볼게 있습니다   09.24
최근답변자 우수답변자
알호다구아

대왕개구리SPEED

알뚜리

올챙이암린이

앞다리차몬드

알GATA3

개구리닥눈삼

알자유주의

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리Jake

꽃개구리개그

개구리처음처럼

개구리flu...

개구리무광

개구리ExDown's

대왕개구리강시

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
진스크립트 광고