실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
PCR이 잘 안돼요...
레벨2 과지주 (대학원생)
gibson assembly cloning을 하기 위해서
vector를 iPCR을 수행중인데
아무리 primer binding site를 바꿔서 진행을 해도
계속해서 multiband가 뜹니다..
게다가 target site의 band가 너무 연하게 떠요..
primer desgin할 때 2nd structure까지 다 고려하고
snapgene 등을 활용해서 multibinding site 생성 여부까지 확인후 진행했지만
사진과 같은 결과만 나옵니다ㅠㅠ
(위의 밴드가 target 하려는 region과 size가 맞는 밴드입니다.)
(하필 multiband로 뜬 아래에 위치한 band의 size가 iPCR로 잘라내려는 부위가 사이즈가 비슷한것도 마음에 걸리네요)
어떻게 해야 PCR이 성공할 수 있을까요..
클로닝 선배님을 살려주세요..ㅠㅠ
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