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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 435  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western blot SDS gel
올챙이rlaeheod(대학원생)  | 08.10 11:39

안녕하세요.

western blot을 하는 석사생입니다.

gel을 만들어서 사용하고 있는데 running gel과 stacking gel 사이에서 버블이 만들어집니다. 

comb를 뽑으면서 젤 사이가 벌어지곤 하는데 왜이런 현상이 나타나는건지 알 수 있을까요?

두 젤은 충분히 굳고나서 사용하며, running젤 먼저 분주 후 isopropanol로 수평을 맞추고 난 뒤에 gel이 굳으면 isopropanol을 제거합니다. 그 뒤에 증류수로 한번 더 wash하구요,,

 

비슷한 경험 있으신분이 계시다면 조언 부탁드립니다.

#western blot
 
#SDS-PAGE gel
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
-_-  |  08.10 11:53   

잉 제가 할 땐 물로 그냥 다 했었는데 아이소프로파놀을 쓰고 냅두나요?

아이소프로파놀이 물기를 빨아먹어서 젤 윗부분이 상한 거 아닌가요 그럼?

-수정- 찾아보니 아이소프로파놀, 부타놀, 70%에탄올 쓰는 레시피가 훨씬 많네요. 그럼 이게 문제가 아닌 거 같은데...

충분히 굳고 나서 사용한다는 게 무슨 뜻입니까?

제 기억엔 테메드랑 에이피에스 첨가하자마자 바로 젤 캐스트에 부었는데...

대왕개구리SPEED  |  08.10 12:07  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 두 gel 사이에 틈이 생긴 현상인데 iPA를 확실하게 제거하는 것이 좋습니다.

세척 횟수를 늘여보세요.

 

- comb도 항상 사용직전에 에탄올로 세척하여 comb을 제거할 떄 저항이 

많이 발생하지 않게 해 주는 것이 좋습니다. 

올챙이rlaeheod  |  08.10 13:38  

-_- 님 안녕하세요.

제가 말씀드리고자하는 바는 캐스터에 젤을 붓고 충분히 굳고나서 전기영동을 진행했다는 말씀입니다 ㅎㅎ 

개구리clickclick  |  08.10 13:41  

증류수로 수평을 맞추면 별도로 washing 과정이 없이 버리고 

살짝 말려주면 되구요. (저는 Trnasfer 할때 사이에 끼우는 .. paper 그거 오래되면 잘라서 뒀다가~ 기울여서 고인 증류수를 제거한 다음에 running gel 만드는  동안 살짝 dry 하고, running gel을 부어줘요) 

isopropanol 사용하면 완전히 제거되야해서 !

증류수로 5번 정도 washing 해줘요.

(눈으로 잘 보면 일렁거리는게 보이는데 그게 없어질 때까지) 

 

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