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대충 검색해서 보니 DH5Alpha는 렌티바이러스용 벡터 클로닝에 안 쓴답니다.
Comp.Cell을 Stbl3 같은 렌티바이러스용 이콜라이로 바꾸세요.
https://www.researchgate.net/post/Could_we_use_the_DH5alpha_instead_of_Stbl3_for_lentiviral_plasmid_transformation_and_cloning
https://blog.addgene.org/plasmids-101-common-lab-e-coli-strains
---이하 수정 내용---
https://media.addgene.org/data/plasmids/52/52961/52961-attachment_B3xTwla0bkYD.pdf
- 해당 vector는 RecA- 균주를 사용하기 때문에 DH5a도 사용가능합니다.
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레벨1
hihalo
(대학생)
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22.08.10 10:32
protocol 에 stbl3쓰라는 것은 알지만 지금 갖고있는게 없어서 Dh5a를 이용중입니다 이 실험에서 DH5a은 mutation 가능성이 있지만 comp cell로 충분한 역할을 한다고 알고있씁니다.
negative control은 잘 뜨나요?
comp.cell 20ul에 ligation product를 1.7ul 넣는 이유가 있습니까?
https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=640861
여기 답글에 나온 대로 컨트롤들을 다 만들어서 스텝마다 체크하신 적이 있습니까?
- 안자른 plasmid를 동일한 양으로 TF하면 어떻게 나오나요?
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레벨1
hihalo
(대학생)
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22.08.12 11:23
speed , -_- / 오...negative ctrl은 안자른 벡터로 트포하면 되는걸까요? 와..
위 링크에 걸린 답글처럼 정말 내가 어느 단계에서 문제가 생겼는지 알고 싶다 하면
컨트롤을 여러 개 세분해서 스텝마다 알아보는 거는 거죠.
일단 지금 안 잘린 lentiV2 플라스미드를 TF 시도해서
현재 Comp.Cell인 DH5alpha에 TF되는지 안되는지부터 알아보고,
프로토콜에 나온 대로 인서트 없이 그냥 잘랐다 붙인 것도 TF되나 안되나 보세요.
전자가 안 되면 Comp.Cell을 바꿔보던가 stbl3을 구해보시고,
후자가 안 되면 라이게이션 스텝의 문제고...