- 우선 incubator 수평을 한번 확인해 보세요.
- 60%쪽이 자라면 90% 쪽은 성장 속도가 느리기 때문에 때문에 세포 활성에
좋지는 않을 것 같습니다.
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레벨4
experiment
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22.08.09 12:44
배지에 세포가 골고루 잘 안 풀어진듯 합니다.
cell을 배지에 잘 풀어준다음 큰 반경으로 무한대모양으로 여러번 섞어주거나 T자형 모양으로 왔다갔다 해주면서 잘 풀어주세요.
이것도 불안하면 피펫에이드 높은 용량으로 두고 천천히 피펫팅해주면서 셀을 고루 잘 풀어주면 좋을 것 같아요.
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레벨2
Completion
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22.08.11 00:00
분화실험이라면 더더욱 세포가 고루게 깔려져있어야 합니다.
dish 혹은 plate를 앞뒤 좌우로 잘 흔들어 주시고, 위 댓글처럼
incubator 수평을 확인해 보시면 좋을 듯 합니다
(핸드폰 수평계 앱도 좋습니다).
저희 연구원분들도 세포를 고루게 seeding 하는 것에 많은 어려움을 겪습니다.
잘 흔들어주시고, 세포 부착할 시간 즈음 현미경으로 계속 관찰해 보시면 좋겠
습니다.
그리고 dish에 media 넣고 소량의 세포를 넣어주는 것보다
cornical tube에서 잘 suspension한 후, dish에 seeding하면
쏠림으로부터 조금 더 자유로울 수 있습니다.
안녕하세요
저의 생각을 말씀드리면요
먼저 Incubator가 한쪽으로 기울어 져서 수평이 어긋하나서 그럴 수 있습니다.
그리고 또한 가지는 계대배양 후 Incubator로 옮겨갈때 기울어 져서 그럴 수 있습니다. 이럴때는 Incubator안에 놓고 골고루 퍼질 수 있도록 흔들어 주시는 게 좋을 것 같습니다.
마지막으로는 거의 없는 상황이지만 가끔 나타나는 상황인데요 dish에 코팅이 안되서 그럴 수 있습니다.
여러가지 한번 생각해 보시길 바랍니다.
감사합니다.
우선적으로 고려해야 할 것은 인큐베이터의 수평입니다.
잘 맞춰주셔야 하고...
Dish에 따라서도 차이가 발생할 수 있습니다.
기본적으로 100 mm dish나 6, 12, 24-well의 경우 바닥면 자체가 넓기 때문에 고루 펴질 수 있으나 96-well의 경우에는 배지의 양 자체로도 문제가 발생할 수 있습니다. 96-well은 100 ul로 배지 부피를 맞춰서 seeding해보세요.. 200 ul로 배지를 넣었을 때하고 cell이 dish에 퍼지는 양상이 크게 다릅니다.
그러나 한쪽으로 cell이 몰렸다면 그건 거의 수평문제에서 기인합니다. 그리고 원심분리 후에 세포를 접종할 때 dish에 고루 넣어주시고 +모양으로 두어번 흔들어주시고 반시계, 시계 방향으로 두어번씩 흔들어주세요..
인큐베이터 수평 체크해보세요. 바로 해결될겁니다!