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질문 Mouse Brain Paraffin section IF staining 섹션 두께
알뚠뚜딘(대학원생)  | 08.07 04:05

안녕하세요!

 

현재 mouse brain에서 IF staining을 시도하고 있는데요..

 

먼저 brain은 PFA 고정 후 Parrafin으로 embedding 하였습니다.

선배랑 제가 따로 section을 진행하였고, sample 모두 받아서 제가 IF staining을 하였습니다.

선배는 5 um으로 section을 하였고 저는 8-10 um으로 section을 진행하였는데요. 일반적으로 parrafin section의 경우에는 5-8 um로 많이 한다고 하더라구요.

IF staining 결과 (IF staining 모두 한번에 진행) 선배 slide에서는 signal 이 굉장히 약하고 specific 하게 staining이 되지 않았습니다(거의 staining이 안 되었다고 봐도 무방).

조직 염색의 경우 section이 얇으면 얇을 수록 resolution이 좋고 깔끔하게 data가 나온다고 생각했는데 조직에 따라서는 두꺼울 수록 결과가 잘 나오는 경우도 있나요? 

제가 8-10 um로 section을 다시 해서 IF staining하는 게 trouble shooting 이 될지 궁금합니다. 모든 step은 똑같은데, section한 사람만 다르니 ㅠㅠ..

 

그리고 paraffin section의 경우 8-10 um가 mouse brain 혹은 lung 보기 너무 두꺼운지도 의견 부탁드립니다 ㅎㅎ

#Parrafin IHC/IF
 
#Mouse
 
#조직 염색
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리imperialvet  |  08.08 12:11  

8-10 um두께라면 뇌 조직의 세포가 multilayer로 제작 되어 현미경으로 관찰시 세포가 여러층으로 겹쳐보일 것입니다. 이는 병리적으로 정확한 세포를 감별해야 할 때 방해를 주는 요소입니다.

따라서, 일반적으로 H&E염색된 장기/조직 관찰을 목적으로 paraffin section을 하는 경우, 3-5 um 두께로 section 하며, IHC/IF와 같이 조직/세포내 검출하고자 하는 항원이 적은 경우, 발현을 좀더 잘 내기 위해 그 이상의 두께로 제작합니다. 

올챙이맨수르  |  08.29 15:57  

마우스의 brain으로 조직염색을 진행할때는 파라핀보다는 cryo로 진행을 합니다 cryo가 절편을 더 얇게 얻어낼수있을뿐만아니라 section시 조직손상도도 적습니다

 

조직이 두꺼울수록 세포층이 두꺼워져 signal이 약하거나겹쳐보일수있기때문에 cryo로 진행하시는것을 추천드립니다

 

또한 위에서 언급이 없어 혹시나 하는 마음에 추가드리면, IF staining, IHC를 진행할경우 마우스 부검시 perfusion후 brain을 적출하여 진행해야합니다. brain내에 혈액이 남아있을경우 signal이 정확하게 관찰되지 않습니다

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