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질문 디스크 확산법으로 천연항생물질과 항생제의 항생효과 비교 실험 피드백 부탁드려요
올챙이허브민트(일반인)  | 08.06 19:24
첨부파일 파일첨부: C1DB382B-DACD-4113-8355-856B607D7F49.png (1.23 MB)
이미지 첨부파일
학교에서 실험합니다. 천연 항생 물질은 마늘 가루 생강 가루 계피 가루를 사용할 거에요! 실험 계획 보고 피드백 좀 해주시면 감사하겠습니다.
Day1.
마늘 가루, 생강 가루, 계피 가루 10g씩 에탄올 100ml와 함께 비커에 넣고 섞는다. (추출액을 만들기 위해서) 파라필름으로 비커를 밀봉한 후 냉장고에 하루 동안 보관한다.
Day2.
(1) 비커에 상층 부분을 스포이드로 거름종이로 한번 거른다.
(2) 디스크를 패트릭 접시에 옮기기 전 핀셋을 화염 멸균한다. (계속) 그리고 디스크를 옮긴다. 각 패트릭 접시에
(3) 마늘 추출액을 스포이드로 디스크에 2ml 씩 떨어뜨린다. 3개의 디스크 중 하나에 항생제 2ml을 더 추가한다. 생강 추출액, 계피 추출액도 이와 같이 실행한다.
(4) 항생제(페니실린)을 2ml씩 3개의 디스크에 떨어뜨린다. 에탄올도 3개의 디스크에 2ml씩 떨어뜨린다.(대조군 역할)
(5) 디스크가 마르는 동안 생물 나라에서 구매한 LB Agar Plate를 하나는 4개의 구역 또 다른 하나는 5개의 구역으로 나눈다.
(6) 생물 나라에서 산 대장균 배양액을 피펫으로 (안되면 일회용 스포이드로) 100ul(0.1ml) 를 배지에 접종한다. 접종한 후 스프레더를 화염멸균하고 대장균을 잘 펴 바른다.
(7) 나머지 배지도 위와 같이 실행한 후 배지를 말린다.
(8) 핀셋을 화염 멸균한 후 추출물, 항생제, 에탄올을 적신 디스크를 배지 위 각 구역에 옮긴다. 옮길 때 디스크가 떨어지지 않도록 핀셋으로 살짝 눌러준다. (할 때마다 핀셋 화염멸균)
(9) 배지를 담고 있는 접시를 파라필름으로 밀봉한다. 배양 준비를 끝마친 배지는 뒤집어 놓는다.
(10) 배지를 배양기 속에 넣고 37도로 하루 동안 배양한다.
Day3.
대장균 생장 억제 정도를 비교하고 자로 재서 정확한 수치를 비교한다.
실험계획에서 피드백해주시면 감사하겠습니당. 그리고 주의할 점도 알려주시면 감사하겠습니다.
질문! 피펫을 사용한다면 대장균을 접종할 때 소독을 어떻게 해야 하나요? 그리고 파라필름으로 밀봉하고 접시를 왜 뒤집어 놓아야 하나요?
그리고 생물 나라에서 디스크를 사려고 하는데 항생제 감수성 디스크랑 그냥 항생제 디스크가 있던데 무슨 차이 인가요?
#항생제디스크
 
#디스크 확산법
 
#항생제감수성실험
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.06 19:35  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 균을 배지에 spreading한 후 disc를 올리고 시료를 disc에 올리는 순서로

실험해야 합니다.

 

- 항생제 disc는 항생제가 들어있는 disc, 감수성 disc는 공 disc이기 때문에

감수성 disc를 사용해야 합니다.

 

- 1개의 disc에 2ml를 올릴 수가 없습니다.

 

- 에탄올 추출물을 그냥 사용하면 에탄올 때문에 항균 활성이 없는

시료라도 억제 환이 나옵니다.

올챙이허브민트  |  08.06 19:48  
-그러면 에탄올 추출물을 그냥 사용하지 않고 어떻게 해야 하나요?
- 그런 디스크에 몇ml 정도까지 올릴 수 있나요? 얼마가 적당할까요?
- 그럼 균을 배지에 펴고 배지를 말린 다음에 디스크를 올리고 그 상태로 추출물을 올려야 하나요? 왜 제가 세운 계획대로는 안되는지 이유를 알려주실 수 있나요?
-나머지 계획들은 실험하기에 괜찮은가요?
답변해주셔서 감사합니다
대왕개구리SPEED  |  08.06 20:11  

- 그러면 에탄올 추출물을 그냥 사용하지 않고 어떻게 해야 하나요?

: 에탄올을 제거한 후 실험하면 됩니다.

수용액 추출물이 아닌 시료의 실험은 실험 경험이 많이 필요합니다.

예로 에탄올 추출물에서 에탄올을 제거하면 물에 녹지 않는 추출물이 남는데

이것은 용액으로 만들어 항균실험을 해야 하기 때문에 조금 어려운 실험

입니다.

 

- 그런 디스크에 몇ml 정도까지 올릴 수 있나요? 얼마가 적당할까요?

: disc는 얇은것과 두꺼운 것 두종류가 있는데 사진의 제품은 얇은 제품으로

30ul 이상은 밖으로 퍼질겁니다.

 

- 그럼 균을 배지에 펴고 배지를 말린 다음에 디스크를 올리고 그 상태로 추출물을 올려야 하나요?

: 네..

 

-  왜 제가 세운 계획대로는 안되는지 이유를 알려주실 수 있나요?

: 일정한 양을 올리기 힘들고 2ml는 건조하기 힘듭니다.

실제 해보면 왜 안되는지 정확히 알수 있습니다.

 

 

올챙이허브민트  |  08.06 20:24  
혹시 에탄올 적신 디스크를 오랜 시간 자연 증발 시킨 후 하는 것도 안될까요? ..
대왕개구리SPEED  |  08.06 20:31  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
실험방법이 디스크확산법인데 건조시키면 확산이 정상적으로 안됩니다.
올챙이허브민트  |  08.06 20:43  
에탄올 추출물에서 에탄올을 제거하면 물에 녹지 않는 추출물이 남는데 이것은 용액으로 만들어 항균실험을 해야 하기 때문에 조금 어려운 실험이라고 하셨는데
- 혹시 에탄올 이용해서 추출한 상태에서 에탄올 제거하는 방법을 혹시 아시나요?
- 그리고 물에 녹지 않는 추출물을 용액으로 어떻게 만드나요?
- 혹시 제가 하기 어려운 실험이라면 대체할 수 있는 추출물 만드는 다른 방법이 있을까요?
dddd  |  08.09 14:09   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Disk diffusion assay 할 때 diffusion 은 agar plate 를 통해 이루어지는 것이지, 항생물질의 용매를 통한 게 아닙니다.

그러므로 disk 에 항생물질을 넣고 완전히 말린 후에 disk 를 plate 위에 얹어야 합니다.

농도를 높이고 싶으면 완전히 말린 후에 다시 넣어주는 걸 반복하면 됩니다.

올챙이허브민트  |  08.11 14:01  
그럼 에탄올로 해도 상관이 없다는 뜻인가요? 혹시 이 실험 계획에서 이상한 점이 있을까요? 아니면 주의해야 할 점이나요
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