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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 같은 membrane으로 다른 antibody 붙일때 washing 시간
앞다리oneday(대학원생)  | 08.05 16:42

선배님께서 웨스턴을 두번 돌리기 싫을때 먼저 phospho-p70 antibody를 붙이고 결과를 본뒤 phospho-p70 antibody 붙인 membrane에 milk로 blocking하고 total-erk1/2 antibody를 붙이면 된다고 하시는데

아무래도 detection을 위해서 sustrate를 분주하다보니 washing을 잘해야될거 같은데 저희는 보통 washing할때 10분씩 3반복을 해주는데 이렇게만 해도 sustrate가 완전히 washing이 될까요? 1시간은 해주어야되나요?

 

#western blot
 
#washing
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123  |  08.06 23:46   

저 방법이 되는지부터 의문이네요.

차라리 sample을 2개 내려서 transfer한 다음

membrane을 반으로 나눈 후에 따로따로 하세요.

개구리세오  |  08.08 07:20  

타깃 단백질의 molecular weight이 다른 경우에는 멤브레인을 마커 사이즈를 이용해서 분리한 다음 각각의 멤브레인을 따로 테스트 하면 한번에 해결 하실 수 있습니다. 

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