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- 네, sodium bicarbonate가 들어간 배지를 사용할 경우 그러죠.
- 부피가 작은 conical tube를 사용하면 오히려 cell pellet이 관찰 잘 됩니다. pipeting안하면 cell이 뭉쳐있어서 권장하지는 않죠. 그리고 영양분이 충분한 새로운 세포배양배지 조건을 만들려고 배지를 교체하는 것입니다.
- 그런 형태의 약물투여는 유의미한 실험결과 도출할 수가 없습니다. 그리고 crude한 약물을 높은농도로 사용하면 세포는 무조건 죽습니다. 정제를 일정부분 거친 약물을 사용하셔야 합니다.
- in vitro, in vivo 각각의 장단점이 있습니다. in vitro의 장점은 세포와 특정 조건간의 관계를 보다 직접적으로 알 수 있는게 장점이죠.
보완을 좀 드리자면..
세포 생존에 있어서 pH의 영향력이 상당합니다. 간단하게만 얘기하면 생존과 직결될 수도 있습니다. 그래서 배지에 phenol red 라는 지시약을 넣어주는 것이지요.. 배지의 색깔만 봐도 다급한 상태인지 아닌지 대략 짐작하도록 해주는 겁니다.
원심분리 후 새로운 배지를 넣어주는 것도 마찬가지입니다. 세포가 배양하던 배양액을 그대로 사용할 경우 세포가 자라면서 배출한 노폐물 등이 존재하겠지요..(밥을 먹었으니 일을 봐야죠) 그런 것들은 세포 배양 환경에 당연히 좋지 않겠지요.. 그래서 신선한 배지를 쓰는 것입니다.
하지만 그것 자체가 짧은 시간안에 세포에 심각한 영향을 주지는 않습니다. 일단 달라붙기는 합니다.. 하지만 세포 캐릭터에 조금씩 영향을 미치게 되면서 알게모르게 세포의 특성이 달라집니다. 그래서 나중에 시간이 지나면 실험 결과가 흔들리지요...
굳이 pellet이 눈에 안 보인다해서 그냥 쓰는 것보다 차라리 원심분리 후 튜브 바닥에 배지를 조금 남을 정도까지만 suction하고 거기에 새로운 배지를 넣어서 seeding하시기 바랍니다.
보통 세포에 처리할 때 분말 형태의 약제를 처리하지 않습니다. 모든 약제는 적절히 용해될 수 있는 용매가 있고 그 용매에 약제를 녹여 최종 처리 농도를 알 수 있게 계산한 뒤 처리합니다. 이 용해 과정에서 약제 powder가 남아 있으면 안됩니다. 이때 용매는 매우 다양해질 수가 있는데 만약 에탄올에 녹여서 썼다면 세포에 에탄올만 처리한 군을 따로 설정해야 합니다. 만약 용매 자체로 효과가 나온다면 그건 약제가 아닌 용매에 의한 효과라고 봐야 합니다. 그래서 보통 실험자들이 가장 선호하는 용매가 D.W.나 혹은 saline (PBS)입니다.
약물 투여 시점의 경우 보통 세포를 seeding하고 세포가 dish에 완전히 붙으면 처리하는 것으로 보지만 그 시간까지 계속 주구장창 세포만 바라볼수 없기 때문에 전날 세포를 seeding하고 다음 날 약물을 처리합니다. 보통 seeding후 24시간 후에 많이들 처리합니다.
in vitro 실험만으로 in vivo에서 보는 생체 내 조직간의 관계를 볼 수 없습니다. 하지만 그렇다고 바로 in vivo로 들어갈 수도 없죠.. 어떤 약제가 효과가 있는지 없는지도 모르는데 바로 in vivo에 들어가는 사람은 절대 없습니다. 생명윤리 관점에서도 그렇고 돈도 그렇고... 그래서 일차적으로 어떤 물질이 세포에 영향을 미치는지 아닌지를 먼저 봅니다. 그 과정에서 세포에 끼치는 약물의 기전도 보는 것이구요.. 하지만 in vitro는 in vitro일 뿐입니다. 그래서 in vitro에서 확실한 효과가 보인다면 그 다음에 in vivo로 넘어가죠.. 하지만 그렇다고 꼭 in vivo에서 효과가 나온다는 보장도 없습니다. 단순 세포와 다양한 세포들로 구성된 조직이 유기적으로 연결된 생명체는 다른 것이니까요.. 님께서 얘기하신대로 in vitro는 어떤 세포에 물질이 어떤 효과를 나타내는지를 보는 것이고, 이 부분에서 확실한 효과가 나온다면 in vivo에서도 효과가 나오는지를 보는 겁니다. 그 과정에서 약물의 side effect라던가 추가적인 기능성을 검증할 수도 있습니다. 여기까지 빈틈없이 완료된다면 말 그대로 빅페이퍼가 되는 거지요..
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레벨2
Completion
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22.08.09 20:24
실험 시 도와주시는 선생님이나 강사분이 안 계시나요...
혹시 실험을 더 이어나가고 싶거나 마무리하고 싶으시다면
메일 연락 주십시오.
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레벨1
응가응가응가
(일반인)
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22.08.22 13:46
completion 님!
실패 요인 분석 후 이를 보완해서 새로운 실험을 설계하려고 하는데
꼼꼼하게 전 과정을 다시 세우려고 하니 디테일한 부분에서
막히는 점이 자꾸 생깁니다.
메일 보내도 된다고 하셨는데 이 사이트에서 쪽지기능이나 그런 것들이
안되는 것 같아서요.
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