실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
vector double digest 질문
레벨1 근당근당 (대학생)
안녕하세요.
vector를 BamHI, XhoI으로 double digestion하고 있습니다.
(vector에 다른 Bam, xho site는 없습니다.)
그런데 RE처리 할 때 Bam,Xho로 한번에 처리하니 extra band가 생기고, 이상해서
1. Bam
2. purify (pcr purification , D.W 40 Elu)
3. Xho
이 순서로 digestion 했습니다.
이때 2번과정 이후 EP를 내려보니 3개의 band가 형성되었는데,
3번 Xho 효소를 처리한 후, 다시 EP를 내려보니 하나의 band만 남은 것으로 확인되었습니다.
결과는 이렇게 나왔습니다.
1. BamHI이 star activity가 있다고 알고 있는데 그래서 enzyme을 너무 과량으로 넣어서 그런건가요?
2. Bam -> purify -> xho 까지 하고 나니 band가 다시 정상적인 size의 band로 나왔는데 이것도 왜그런 것인지 모르겠습니다.
3. 이 sample들 모두 버리고 다시 xho, Bam순서로 진행해야 할까요?
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