실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
transfer가 일부가 잘 되지 않습니다.
레벨5 oneday (대학원생)
western blot 과정중 항상 transfer한 후 겔을 coomassie에 넣어 transfer이 잘 되었는지 확인을 하는데요.
transfer는 transfer buffer을 가득넣어주고 100V, 0.4A, 1시간30분동안 하면서 통주변에 얼음으로 감싸고 20~30분마다 ice pack도 갈아주고 최대한 안따뜻해지게 해주면서 하는데요.
transfer후에 겔을 확인하면 55kDa 정도 위로는 단백질이 남아있습니다.
다행이 저희가 확인하고자하는 단백질은 30~40kDa이지만 완벽하게 transfer가 되지 않는것에 의문이 되는데요. 매번할때마다 이러니 답답합니다. 최대한 nitro cellulose 덮고 whitepaper두장덮고 기포를 빼주기위해서 스크래퍼로 살살 누르고 최대한 밀착되게 마지막에 black, clear plastic으로 꽉 잡아서 transfer을 해줍니다.
머가 문제일까요?ㅜㅜ 도와주세요.
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