실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
Ni-NTA regeneration시 침전물의 정체가 뭘까요?
레벨1 Tedi (대학생)
안녕하세요,
단백질 정제를 주로하는 대학원생입니다.
여느때와 마찬가지로 LC와 Ni column을 이용해 단백질 정제 중이었습니다만,
Striping 및 Ni charging 이후 시간이 촉박하여 곧바로 Column equilibration을 진행하였습니다.
그런데 곧바로 A Buffer가 Injection되는 관을 따라서 침전물이 보였습니다.
Ni Solution과 A buffer가 혼합되며 침전물이 생성되는 것처럼 보였는데, 침전반응이 생길만한 것이 떠오르지 않습니다.
사용하는 buffer로는
Ni chargeing - 100mM NiCl2
Equilibration - 50mM potassioum phosphate, 100mM NaCl, 60mM Imidazole pH7.5
사용합니다.
위 buffer들로 인하여 침전물이 생길 수 있습니까?
P.S.
100mM NiCl2를
Phosphate/NaCl
또는 Imidazole과 혼합시에는 별다른 침전물이 보이지 않습니다만,
Phosphate/NaCl,/Imidazole buffer와 혼합시에는 침전물이 보이는군요.
실험이야 완충만 잘 해주면 상관없지만 침전물의 정체가 궁금하여 질문드립니다,
감사합니다.
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