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질문 CRISPR Cas9 knock-out 후 gene 도입 관련 질문드립니다.
알웨스턴공장매니저(대학원생)  | 08.02 14:29

안녕하세요, Crispr Cas9 knock-out 시스템을 랩에 구축하려 공부중인 대학원생입니다. 궁금한 점이 있어 질문드립니다.

 

guideRNA는 shRNA와는 다르게 반드시 CDS만을 target해야 하는 것으로 이해했습니다.

 

Cas9과 gRNA를 expression하는 vector를 transfection하는 system으로 knock out을 진행하고자 하는데요, 이를 통해 knock out이 발생한 cell에서는 Cas9과 target의 CDS에 대한 gRNA가 계속 발현하게 될텐데,

 

이 cell에 만약 WT 혹은 mutant의 target gene을 plasmid를 통해 도입시켜 준다면, 도입시켜준 gene에 대한 knock out도 발생하게 될것으로 예상되는데, 실제로 그러한지 궁금합니다. 제가 이해한 바가 맞는지...

 

그리고 이러한 현상을 피하기 위해서 반드시 doxycyclin-dependent하게 발현하는 cas9과 같은 제품을 사용해야 하는지도 알고 싶습니다.

#knockout
 
#Crispr cas9
 
#guideRNA
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