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Dr. Youn
(비회원)
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22.08.02 17:12
어떤 protein을 WB하시는지 모르겠지만, 유명한 p53을 예를 들어보겠습니다.
이 단백질은 여러 외부적인 스트레스에 의해 translation 후 단백질의 여러가지 변형이 일어납니다.
*. p53 modifications: phosphorylation, ubiquitination, sumoylation, neddylation, acetylation, methylation, O-GlcNAcylation, ADP-ribosylation, hydroxylation, and β-hydroxybutyrylation
어떤 자극의 정도에 따라서 이러한 modified p53 protein의 발현이 점점 증가되었거나 inhibitor에 의해서 증가된 발현이 감소되었다고 가정해보겠습니다.
WB 수행하고 band의 두께가 두꺼워졌다 얇아졌다하면 뭔가 시험이 잘 되가나보다 생각이 듭니다. 하지만 우선 의심해 볼것이 이거 '단백질 loading 다르게 된거 아니야? 정말 동일량이 loading된거 맞아?' 라는 의심부터 하셔야 합니다. 그리고 이것을 해결하기 위해서는 엄초님이 물어보신 2가지를 확인하면 됩니다. total p53, house keeping protein의 발현.
*. house keeping 단백질: actin(43kDa), tubulin(55KDa), GAPDH(36KDa) 등
modified form과 total form만 보여줘도 상관없지만
처음 다루는 세포로 실험을 한다면 3가지를 모두 보여주는 것이 좋다고 생각됩니다.
그럼 도움이 되셨길 바랍니다.