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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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질문 폰슈 결과 봐주세요 ㅠㅠ
알웨구러지(대학원생)  | 07.31 18:35

upload_image   upload_image

transfer 후 폰슈해봤는데 사진처럼 가운데에 큰 구멍이 있어 밴드가 안보입니다.

pvdf membrane을 사용하고 메탄올에 담근 후 dw, trans buffer에 적셔 gel에 올리고 기포를 완벽하게 제거해주었습니다..

running까지 잘 진행된것을 확인했고, transfer는 90v에 120분간 진행했습니다.

총 3개의 gel을 transfer 했고, tank 두개를 사용하여 tank1에서 진행한것은 오른쪽 사진결과, tank2는 왼쪽사진과 사진은 없지만 transfer가 잘된것 하나 이렇게 진행했습니다.

기포라고 하기에 너무 큰 구멍인거 같은데 왜그럴까요??ㅠㅠ

고수님들 답변 부탁드립니다...!!

#western
 
#transfer
 
#폰슈
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리clickclick  |  08.01 09:40  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

질문 내용만 가지고 유추하면,

PVDF 는 소수성이라서 메탄올로 activation (?) 친수성 되게 하는거라

메탄올에 ~10min 정도(gently shanking) 해주는데, 그 다음에 transfer buffer용액으로도 2-3 min 정도 담궈서(gently shanking) membrane 그 용액과 분리가 안되게 해 준다음(평형?)에 transfer해보세용.~ 

중간에 DW 적시고???transfer buffer도 (좀 담궈나야 하는데??)적시고 그래서 그런 것이 아닐까요??? 

 

 

대왕개구리SPEED  |  08.01 09:57  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- membrane을 충분히 activation, air 제거시 정확히 제거 등으로 질문의

문제는 해결 가능할 겁니다.

 

- 참고로 왼쪽 membrane의 시료는 좋은 상태가 아닙니다.

알웨구러지  |  08.01 14:58  

SPEED님 메탄올에 10분정도 담궈놨는데 더 오래 해야되겠군요

사진의 membrane 모두 같은 샘플로 반복한것인데 상태가 좋지 않은것은 어떻게 판단할수 있나요..?

답변 감사드립니다!

앞다리experiment  |  08.03 17:28  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

PVDF membrane이 어디 제품으로 사용하시는지는 잘 모르겠지만 저희는 biorad 제품 이용하는데, 100% methanol에 1분만 담궈도 활성화 충분히 됩니다. 

다만 methanol에 담근뒤 바로 gel 위에 얹으면 gel에 묻어있는 running buffer 혹은 transfer buffer랑 접촉하면서 저런 방울처럼 동그란 구멍이 생겨요.

methanol에 1분정도 담근뒤에 transfer buffer에 10분정도 담근 후에 gel위에 엊어주세요.

그리고 sponge위에 얹고 롤러나 다른 둥근 물체로 기포 충분히 빼주면 저런 구멍 안 생깁니다~

올챙이천향루  |  08.03 18:00  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

트랜스퍼 버퍼를 다시 만들어서 사용해보세요.. 일반적인 기포라면 저렇게 찌그러진? 모양으로 나올수가 없는데 제 경험상 트랜스퍼 버퍼의 문제였습니다.

만들어 쓰신다면 조성이 정확히 맞는지 확인하여 보시고 재사용하는 거라면 새로 만들어서 써보시길 바라겠습니다.

올챙이필1  |  08.04 14:39  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

제가 겪었던 경험이네요.

댓글처럼 이거 저것 다해봤는데. ㅎㅎ

 

원인은 바로 파워써플라이 조건입니다. 

볼트로 말고 암페어로 바꿔서 하세요. ㅎ 

 

 

알웨구러지  |  08.05 10:47  

필1 님 암페어로 바꾸면 어떤 조건으로 하시나요?
제가 precast gel을 사용하고있는데 설명서에는 볼트 기준으로 되어있어서요..! 

dlvlfwns83117@hanmail.net  |  08.09 11:01   

상업적 프로토콜은 그 회사에 적합하게 설정된거라. 

나한테 맞게끔 설정하는거에요. 

저는 190 암페어 90분으로 합니다. 

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