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레벨5
clickclick
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22.08.01 09:40
질문 내용만 가지고 유추하면,
PVDF 는 소수성이라서 메탄올로 activation (?) 친수성 되게 하는거라
메탄올에 ~10min 정도(gently shanking) 해주는데, 그 다음에 transfer buffer용액으로도 2-3 min 정도 담궈서(gently shanking) membrane 그 용액과 분리가 안되게 해 준다음(평형?)에 transfer해보세용.~
중간에 DW 적시고???transfer buffer도 (좀 담궈나야 하는데??)적시고 그래서 그런 것이 아닐까요???
- membrane을 충분히 activation, air 제거시 정확히 제거 등으로 질문의
문제는 해결 가능할 겁니다.
- 참고로 왼쪽 membrane의 시료는 좋은 상태가 아닙니다.
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레벨1
웨구러지
(대학원생)
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22.08.01 14:58
SPEED님 메탄올에 10분정도 담궈놨는데 더 오래 해야되겠군요
사진의 membrane 모두 같은 샘플로 반복한것인데 상태가 좋지 않은것은 어떻게 판단할수 있나요..?
답변 감사드립니다!
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레벨4
experiment
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22.08.03 17:28
PVDF membrane이 어디 제품으로 사용하시는지는 잘 모르겠지만 저희는 biorad 제품 이용하는데, 100% methanol에 1분만 담궈도 활성화 충분히 됩니다.
다만 methanol에 담근뒤 바로 gel 위에 얹으면 gel에 묻어있는 running buffer 혹은 transfer buffer랑 접촉하면서 저런 방울처럼 동그란 구멍이 생겨요.
methanol에 1분정도 담근뒤에 transfer buffer에 10분정도 담근 후에 gel위에 엊어주세요.
그리고 sponge위에 얹고 롤러나 다른 둥근 물체로 기포 충분히 빼주면 저런 구멍 안 생깁니다~
트랜스퍼 버퍼를 다시 만들어서 사용해보세요.. 일반적인 기포라면 저렇게 찌그러진? 모양으로 나올수가 없는데 제 경험상 트랜스퍼 버퍼의 문제였습니다.
만들어 쓰신다면 조성이 정확히 맞는지 확인하여 보시고 재사용하는 거라면 새로 만들어서 써보시길 바라겠습니다.
제가 겪었던 경험이네요.
댓글처럼 이거 저것 다해봤는데. ㅎㅎ
원인은 바로 파워써플라이 조건입니다.
볼트로 말고 암페어로 바꿔서 하세요. ㅎ
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레벨1
웨구러지
(대학원생)
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22.08.05 10:47
필1 님 암페어로 바꾸면 어떤 조건으로 하시나요?
제가 precast gel을 사용하고있는데 설명서에는 볼트 기준으로 되어있어서요..!
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dlvlfwns83117@hanmail.net
(비회원)
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22.08.09 11:01
상업적 프로토콜은 그 회사에 적합하게 설정된거라.
나한테 맞게끔 설정하는거에요.
저는 190 암페어 90분으로 합니다.