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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 transformation 후 plate에 분주할때 ul
앞다리인턴임다(대학생)  | 07.28 20:43
안녕하세요 아직 초짜 학부생입니다
50ng/ul 농도의 DNA 1ul를 transformation 시켰는데 항생제가 들어있는 plate에 분주하여 spreading 할때 보통 얼마로 분주하면 될까요…?

저는 10ul를 분주했는데 너무 적게 했다라고 말씀만 해주시고 얼마를 넣어야되는지 알려주시지를 않으셔서요

또한 integration된 primer, copy수가 많은 primer 들이 효율이 좋기때문에 양을 더 적게 분주하는걸로 알고있는데 맞을까요?

공식이라던지 짐작할수 있는 방법이 있으면 알려주실수 있을까요?
#transformation
 
#spreading
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-_-  |  07.29 01:12   

용어를 좀 정확히 써주셨으면 좋겠고, 제 경험 상 적어도 50-100ul는 깔았던 거 같네요.

개구리범수리  |  07.29 12:49  

만약에 기존에 이미 구축이 된 상태의 plasmid를 TF하신거라면 저같은 경우는 100ng TF하고 20ul 깔아줬어요. 근데 이것도 competent cell 수가 다 다를테니 뭐 의미가 없기는 하지만, 

루틴하게 만들어서 사용하는 competent cell이라면 이번에 10ul 깔고 콜로니가 적으면 다음에 늘려서 해주시면 됩니다. 정해진 양은 없어요.

다만, 새롭게 클로닝을 진행한 DNA라면 일반적으로 TF이후 리커버리하고 난 후에 spindown시켜서 50ul정도로 resupension시켜서 모두 깔아주는게 일반적입니다.

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