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본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
- 피젯의 원래 이름이 어떻게 되나요?
- host를 DH5a를 사용했나요?
엠체리 자체는 원래 붉은 형광 나는 게 맞습니다.
스크리닝 용으로 위아래에 다른 서열을 조합해서 유도체 유무에 따라 발현조절이 되게 만든 서열을 쓸 수 있는데 그걸 다 떼고 엠체리만 넣으면 붉은 형광이 나오겠죠.
- 붉은 색이 문제가 아니라 DH5a에서 발현되는 조건인지가 문제입니다.
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qkqh1
(대학생)
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22.07.29 08:59
pjh18 vector입니다! 제한효소로 정확히 mcherry 유전자만 자른 것은 맞는데, 설명을 듣기로는 dh5에서는 발현이 되지 않을 거라고 말씀하셨었습니다...
- pJH18 vector를 구매한건가요 만든건가요? 인터넷에 정보가 안나오는 것
같습니다.
- pJH18의 promoter가 어떤 종류인가요?
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레벨1
qkqh1
(대학생)
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22.07.29 10:06
pjh18 vector는 실험실에서 받았습니다! 프로모터는 mcherry 근방에는 tetR프로모터가 있습니다.
- TetR gene이 같이 있으면 발현이 안될것 같습니다만 전체 map을 알수
없어서 판단하기 힘듭네요.
- 어떤 항생제로 배양했나요?
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레벨1
qkqh1
(대학생)
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22.07.29 10:36
클로람페니클을 사용해 배양했고 tetR프로모터를 기점으로 좌측 우측에 각각 mcherry 유전자와 tetR유전자가 들어가 있는 모양입니다.
- 현재 정보 만으로는 발현이 안될 것 같습니다.
- TetR promoter + tetO구조일건데 tetR이 결합될것 같습니다.
원글자님이 삽입 위치가 표기된 벡터 맵이나 서열을 올려주시면 문제파악이 훨씬 쉬울 거 같습니다.
-또 dh5는 cloning vector로 알고 있는데 왜 형질이 발현되었을까요?
이 부분에 대해선 https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=190632 의 답글을 한번 읽어보시는 게 어떨까 싶습니다.
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레벨1
qkqh1
(대학생)
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22.07.30 23:56
두 분 도와주셔서 감사합니다. 궁금증이 거의 해결된 것 같습니다. 다만 유전자 서열은 연구실에서 제작한 것으로 알고 있어 제 맘대로 올리면 안될 듯 합니다. 첫번째 질문은 연구실 선배님께 여쭤보도록 하겠습니다. 열심히 답변해주셔서 정말 감사합니다.
- tetR promoter에서 tetO가 없다면 DH5a에서 발현이 됩니다.
- DH5a도 PT7이 아니고 다른 promoter를 사용하면 발현 가능한 균주입니다.