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레벨1
1954열정
(대학생)
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22.07.28 14:23
transformation 이 되지 않은 cell을 거르기 위해 amp를 첨가합니다
- TF 후 20ml -> 1L를 바로 배양하나요?
- plasmid 1개만 들어있는 cell이면 계속 배양하면 됩니다.
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레벨1
1954열정
(대학생)
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22.07.28 14:26
아, cell stock을 풀어서 사용하는겁니다
제 질문은 원래 cell을 액체 배지에 넣기 전에 항생제를 먼저 넣고, cell을 넣어야 하는 걸로 알고 있는데
제가 항생제를 나중에 넣었는데 괜찮은지 여쭙고 싶습니다
괜찮습니다. 3시간 뒤에 Amp 넣었다고 해서 Amp 가 먹히지 않는 것은 아닙니다.
결국 세포가 Amp의 영향을 받아 Amp resistant 가 없는 세포는 죽는 방법을 사용하시는 것 같은데 세포가 항생제의 영향을 받아 죽기까지는 시간이 걸리잖아요.
Amp 처리 후 바로 실험에 사용하는 것이 아니라 Amp 가 충분히 영향을 받아 resistant 가 없는 세포가 죽을 때까지 충분히 Amp 노출만 시켜주고 (O/N 혹은 항상) 실험에 사용하면 됩니다.
결론
1. 어차피 Amp에 노출되면 죽을 애들은 죽고 살 애들은 삼.
2. 3시간 동안 노출 안된 건 큰 문제가 되지 않음.
(더 오랜시간 키운다는 전제하에)
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레벨1
195465
(대학생)
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22.07.28 17:02
계속 걱정했는데 친절한 답변 감사합니다!!
많이 배우고 갑니다~!