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질문 His-tag / Ni-nta에서 EDTA 사용
알Dozmal(대학생)  | 2022.07.26 09:33

어떤 protein의 ubiquitination을 확인하기 위한 실험을 진행중입니다. His-tagged된 ubiquitin을 transfection하고 배양 후 MG132 6시간 처리하고 lysis 하였습니다. 이후 Ni-nta 로 정제 후 western blot을 진행하는 방식입니다.

궁금한점이 제가 사용하는 lysis buffer 조성중 2mM의 EDTA가 들어가는데, chelate로 세포막을 약화시켜 lysis를 돕는다고 알고 있습니다. 그런데 EDTA가 Ni-nta 에서 ni 이온을 chelating하여 elution 시킨다고 하는데, 그렇게 되면 His-tag가 못붙을 것 같은데...

2mM의 EDTA가 정제에 큰 영향을 미칠수 있는건지 궁금합니다. 

#ni-nta
 
#edta
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2022.07.26   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- EDTA 20mM 까지 사용가능한 Ni-NTA resin이 있기는 하지만 일반 resin의

경우 binding capa.가 줄어듭니다. 

 

- lysate를 UF로 buffer change를 한 후 정제를 하면 될것 같습니다.

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