실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
IP 수행중인데 궁금한 점이 있어서요~~
레벨2 신입입니다 (대학생)
안녕하세요, 석사 진행중인 학생입니다.
현재 primary cell line에 tagged protein을 overexpression 시킨 다음에,
coIP및 Western blot으로 interaction을 보고 있습니다.
overexpression시킨 HA-A 단백질과 primary cell의 B 단백질간의 interaction을 본다고 생각할 때,
몇가지 질문이 있는데요,
1. input 과 coIP sample을 western으로 보여줄때는 모두 같은 membrane에 위치해야하나요?
일단 제 생각으로는 밴드 노출시간이 달라지기 때문에, 반드시 같은 membrane 위에 input 및 sample이 있어야한다고 생각합니다.
그런데 input과 sample을 따로따로 보여주는 데이터도 있더라구요,
이래도 괜찮나요?
2. input 과 co-IP sample을 같이 보여준다고 할 때
IP가 너무 잘되어 input 및 co IP sample을 같이 현상하면, ecl pico를 이용해서 진행함에도 불구하고, B 단백질이 input에는 너무 적고, IP sample에서는 너무 많습니다.
노출을 줄이면 input에서 안보이고, input이 보이면 IP sample이 가운데가 하얗게 나오는 ghost 현상이 계속 발생하고 있습니다. 이를 해결하는 방법이 있을지요...? 현상은 film이 아닌, 기계를 이용해서 하고 있습니다.
Bio마켓 프리미엄