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레벨5
ʕ•ﻌ•ʔ뀨
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22.07.20 15:39
사진이 PBMC에서 NK cell 분화로 유도하는건가요?
아니면 cell line인가요?
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레벨2
Derick
(과기인)
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22.07.20 15:52
답변 감사합니다 선생님.
지금 PBMC 에서 NK 분화 유도 하고 있습니다.
18일 월요일 오전에 PBMC를 하였고, 2시경에 IL-2 처리 및 배양기에서
24시간 배양 후 2차 IL-2 투입 하고 또 24시간이 지난 후 찍은 사진 입니다.
처음 PBMC 했을때와는 확연하게 세포 수가 늘기는 했는데,
지금 모습이 T cell 인지 NK 인지가 확실하지 않네요..
NK 세포는 뭉쳐서 자라는 형태를 가지고 있다고 알고 있는데,
많이 뭉친다는 느낌이 없습니다. (일부 뭉쳐있는 부분은 있긴 합니다)
구글링 해봤을때 NK 세포는 약간 마름모? 의 뿔 같은 모습 도 가지고 있는데
(물론 원형의 모습을 가지고 있는 NK세포 모습도 있긴 했습니다)
지금 현미경 사진으로 봤을때는 원형의 모습이여서..
NK세포 모양이 정확히 이게 맞는지 잘 모르겠습니다.
지금 세포의 모습은 T cell 의 모양과 비슷한 것 같기도 하구요..
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레벨5
ʕ•ﻌ•ʔ뀨
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22.07.20 16:00
부유하고있나요 아니면 부착되어있나요?
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레벨2
Derick
(과기인)
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22.07.20 17:18
지금은 부착해서 자라고 있습니다.
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레벨5
ʕ•ﻌ•ʔ뀨
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22.07.20 17:27
뭉쳐서 자라나는게 잘자라나고 있는게 맞긴해요. (노랑색으로 보임)
PBMC에서 분화해서 된 NK cell은 마름모?모양으로는 당장 나오지 않습니다.
FACS 기계가지고있나요?
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레벨2
Derick
(과기인)
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22.07.20 18:52
답변 감사합니다 선생님.
지금 #1 , #2 로 나눠서 배양 하고 있는데
사진은 #2 이고 #1은 T75 플라스크가 가득 찰 정도로 자라 있어서 지금 막 T175 에 sub culture 해주고 왔습니다.
(부착은 아래에 다 되어 있고 더이상 부착할 곳이 없어서 그런지 위로 부유 하는 애들이 보여서 깜짝 놀랐습니다. 내일 이면 #2 도 T175 계대 해야 할것 같긴 하네요.)
선생님 께서 말씀 하신 것 처럼 마름모 모양은 7일차 때부터 보인다고 하네요.
잘 자라고 있다고 말씀 주셔서 한결 마음이 편해집니다 ^^
NK 때문에 FACS 분석기도 중고 주문했는데 (이건 중고도 겁나 비싸네요 진짜.. ) 다음주에 연구실 입고 예정이고 제조사 에서 교육팀 내려온다고 하니.. 천상 배양기간 14일 근접해서 FACS 찍어 볼꺼 같긴 합니다 ㅎㅎ
그런데 원래 NK 세포가 이렇게 빨리 크나요??
PBMC 하고 Adam 이라는 계수기 돌렸을때 세포수는 6.00 E6 에 vaible 99%
로 확보한 샘플을 T75 플라스크에 반씩 나눠 배양한지 56시간째 인데..
플라스크가 가득 찰 정도로 자라나 있어서 깜짝 놀랐네요..ㅎㄷㄷ
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레벨5
Coolzinc
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22.07.20 19:30
Cell line이 아닌 PBMC 를 이용한 ex vivo expansion을 하시는거네요.
초기 T75 flask에 seeding한 total cell의 concentration은 얼마일까요?
제 경험상 aCD16 coating을 해서 키운다고 해도 feeder cell 없이 cytokine 처리만으로
그렇게 빨리 자라지는 않아서 T cell expansion을 의심해봐야하지 않을까 싶습니다.
그리고 지금 배율의 사진보다는 좀 더 낮은 배율의 사진으로 보아야 NK cell의
뭉침 정도를 알 수 있을 것 같네요. 혹시나 나중에라도 올려주신다면 보고 답변드리겠습니다.
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레벨2
Derick
(과기인)
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22.07.20 19:38
답변 감사합니다 선생님
내일 답변에 배율 낮은걸로 해서 다시 한번 올려 보도록 하겠습니다 ^^
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레벨5
ʕ•ﻌ•ʔ뀨
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22.07.21 08:56
제가 NK cell 분화로 진행했을때 보통 2일때는 25Flask에서 꽉차지 않고, 3일차쯤에 반정도?찬거같네요.
현재 셋업중이니 중간중간 FACS로 NK cell 퍼센트 확인하면서 진행하시는게 좋을꺼같아요. (셀 땔때마다 FACS용으로 약간 빼주면될꺼같아요)