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single fly pcr할 때 gDNA 농도가 낮아요
레벨2 bioer (대학원생)
안녕하세요
저는 초파리를 모델동물로 연구하고 있는 대학원생입니다.
single fly pcr을 하려고 하는데, OR로 gDNA를 뽑으면 농도가 대략 1000ng/ul
정도 나오는데요,
실제로 실험에 사용할 233 {nos-cas9-mSA, Pax-GFP} attp40 초파리 라인을
한마리씩 뽑으면 농도가 200ng으로 나와요.
인젝션 보내고 제가 찾는 라인 screening 할때 한 마리씩 single fly pcr하려고 하는데, 농도가 낮으니까 pcr도 잘 밴드가 안 뜹니다.
원래 single fly pcr방법으로 gDNA 뽑을 때 초파리 라인 마다 농도가 다른가요??
제가 사용하는 방법은 1X SB buffer를 30ul넣고 호모게나이저로 약 2분간 갈고 37도에서 30분간 incubation 시키고 95도에서 5분간 둔 후에 최고 스피드로 원심분리하고 바로 얼음에 꽂아서 농도 측정 후 pcr하는 것으로 하고 있습니다.
혹시 single fly pcr할 때 gDNA 뽑는 다른 방법이나 제 방법에서 고칠 점이 있을까요?
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