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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 세포 배양 질문입니다
알dwvor(일반인)  | 07.13 21:08

안녕하세요 세포주 은행에서 세포 분양 받아 cell culture를 처음 진행해 보려는 학생입니다 몇가지 질문이 있어 이렇게 여쭤봅니다

IMR-90 cell line 을 분양받았는데 배지로 MEM 을 쓰라고 되어있더라고요 근데 CO2 인큐베이터가 없어서 배지를 L-15배지를 사용하려하는데

1. MEM 배지가 아닌 L-15 배지로 IMR-90 cell culture 해도 잘 자랄까요?
2. L-15 배지를 사용하면 CO2 조절 안되고 온도만 조절되는 인큐베이터로 배양할 수 있는건가요?
3. 처음 분양 받아서 배양할 때 그냥 평범한 계대배양 방법으로 하면 되나요? 세포주 은행에서는 처음 분양 받고 할 때는 원심분리를 해서 어떻게 하라고 나와있는데 이 방법으로 해야하는건가요?

 

#cell culture
 
#L-15
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리영빙구  |  07.14 09:16  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

일단 답변만 빠르게 드릴께요

1. 알수없습니다 저라면 media 안바꿀듯합니다(회사는 조금 달라질수있어도요)
더군다나 세포분양받은 상태라면 stock으로 왔거나 배양된 채로 왔다는 건데 stock으로 올때 기존 사용하던 media를 쓰는게 그나마 세포에 스트레스를 덜 주고, 배양된 채로 왔다면 갑자기 media가 바뀌게되는데 그게 세포한테는 어마어마한 스트레스입니다(세포 다죽거나 안자라요/보통 media 교체할때도 몇번 계대하면서 바꿀 media 조금씩 섞어서 적응시킵니다)

2. 제가 L-15 media는 잘 모르지만 동물세포 배양에서는 CO2 인큐베이터 없으면 안되는 것으로 알고 있어요 이론상 CO2의 농도로 인해 조절되는게 있어서 그래요(이건 조금 찾아보심이 좋을듯해요) e.coli처럼 온도만 조절된다고 자라지 않습니다
결론은 어떤 배지던 CO2인큐베이터가 필요하다는 겁니다

3. 1번이랑 연결되는데 stock으로 왔다면 'Cell thawing'이라고 찾아보셔야됩니다 stock을 만들때나 풀때 중요한게 DMSO라는 시약인데 일반 계대배양에서는 사용하지 않다보니 주의해야될 내용들이 있습니다
만약 배양된 채로 왔다면 계대배양을 하면 되지만 media가 준비되지 않았다면 실험진행이 어려울듯합니다
질문에 나와있는 말로 생각해볼때 stock으로 받으신듯 하네요
그렇다면 세포주은행에서 보내준 protocol대로 진행하셔야 됩니다

알dwvor  |  07.15 01:49  

답변 너무 감사드립니다 stock으로 온게 아니고 그냥 계대배양 한번 더 해주면 될 거 같습니다 감사합니다

혹시 추가로 몇가지 더 질문해도 될지요?

1. 처음 분양을 받으니 t25 플라스크에 배지가 가득 차서 와있는데 그냥 동일하게 계대배양을 진행해도 되는거지요?

2. CO2 인큐베이터가 없다면 가능한 다른 방법은 없을까요?

정말 감사합니다

개구리영빙구  |  07.15 09:10  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

세포주은행에서 배양된 채로 받으셨나보네요 그러면 생각하신대로 계대하시면 됩니다

1. 네 원래 계대하시던 방법 그대로 진행하시면 됩니다
아시다시피 T25 flask에서도 표면처리되어있는 면에만 세포가 붙어서 살기 때문에 현미경으로 확인하시고 washing/trypsin 처리 해주시면 됩니다
배지가 꽉차서 오는건 배송중에 한쪽으로 배지가 쏠려 세포에 배지공급이 안될수도 있기때문에 그렇게 보낸 걸 꺼에요

2. 제 생각에는 무리일듯합니다(거의 세포배양할때 배지 없이 키우는 거랑 같은 수준이라)

알dwvor  |  07.15 20:27  

네 알겠습니다 도움 주셔서 정말 정말 감사합니다

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