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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 제한효소 인서트 분실
알qkqh1(대학생)  | 07.13 17:08

안녕하세요. gene cloning을 위해 실험을 하고 있는 학생입니다.

현재 vector, insert 1은 준비가 되었는데, insert 2가 제한효소 처리만 하면 사라져서 여쭤보고 싶습니다. insert 2는 플라스미드를 pcr 한 dna로 insert 1과 size도 비슷합니다. 또한 pcr 프로덕트를 gel elution한 후 nano drop하면 분명히 존재하고, 순도 또한 insert 1과 크게 차이나지 않는데 제한효소 처리만 하면 smear조차 나타나지 않고 아예 검은 구멍으로 나타납니다... 사용한 dna 분량은 1ug으로, 일단 내일은 2ug으로 늘려 사용해보려고 합니다. 혹시 추가적으로 조작해보면 좋을 조건이 있을까요?

#제한효소
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  07.13 19:29  

- PCR prodcut를 elution하지 않고 EtOH 정제 후 잘라서 전기영동 확인해

보세요.

알qkqh1  |  07.14 09:02  

pcr 프로덕트를 아가로스 겔에 전기영동해 존재를 확인한 후 gel elution하였기 때문에 pcr 프로덕트에는 문제가 없는 것 같습니다..

대왕개구리SPEED  |  07.14 09:08  

- PCR product가 없어서가 아니라 문제점을 확인하는 단계입니다.

알qkqh1  |  07.14 10:16  

아 최종 산물을 말씀하시는 건가요? 최종 산물은 정제 하기 전 존재를 확인하기 위해 겔에 전기영동 하였는데, 그 과정에서부터 dna가 아예 보이지 않습니다.

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