실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
HisPur Ni-NTA Purification시 Elution result check 시 multi band
레벨2 agaz (대학생)
1:Ladder 2:supernatant of cell lysate before induced 3: supernatant of cell lysate after induced 4~6: purified protein Elution 7: 알고있는 protein 8:Ladder
안녕하세요, 현재 저는 pet28a(+)를 backbone으로 recombinant protein을 발현 중에 있습니다. 4~6번까지 sample은 300mM imidazole condition으로 His tag정제를 한 결과물입니다. 여쭤보고 싶은 것은 제가 예상한 protein의 분자량이 약 60kDa에서 보여야 하는데 4번 lane에서 여러 밴드가 뜨는 것을 확인하였습니다. imidazole의 concentration이 적은 것은 아닌 것 같은데 여러 밴드가 뜨는 이유가 궁금합니다. 또한, 기본 pet 28a(+)에서 thrombin cut을 하지 않고 His-tag purification만 해도 되는 지도 궁금합니다.
감사합니다.
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