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2x, 20x 라는 x의 경우 배수를 말합니다.
(concentration의 경우는 농도)
즉 2x = 2배, 20x = 20배
final concentration의 2배, 20배의 농도로 만드시면됩니다.
(ex; 250nM의 20배는 5000nM=5uM)
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레벨1
초초초초초보
(과기인)
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22.07.11 14:53
감사합니다ㅠㅠ 선생님
그러면 제가 100 uM stock을 만들어놓았으니까
20x target primers가 Final concentration 900 nM 이 되게 하려면
100 uM 을 18 uM로 희석하면 되겠네요!
혹시 18 uM 5 ul 만들어놓고 그 중 1 ul 를 넣고 supermix랑 sample이랑 넣어서 Total volume 20 ul을 넣으면 18 uM (900 nM) 이 1/20 으로 희석이 되는건가요...?
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레벨5
ʕ•ﻌ•ʔ뀨
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22.07.11 15:06
네 전체 20ul 중에 1ul만 들어가면 1/20입니다.
전체 사용할 volume 생각하셔서 만드시면되요.
(loading 할 sample 수량 +1 만드시면되요)
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레벨1
초초초초초보
(과기인)
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22.07.11 15:55
아하.. 선생님..
20X target primers/probe 900nM/250nM 인 것이 1 ul
들어가는 거면 Primer + Probe = 1 ul 가 되게 해야하는 건가요..?
그러면.. 비율을.. 어떻게.. 해야하나요..ㅠㅠ
임의로 0.5 ul, 0.5 ul 넣는걸로 하고 Primer 36 uM (900 nM) 0.5 ul 만들고 Probe 10 uM (250 nM) 0.5 ul 만들어서 둘이 합치면 20X Primers/Probe 900 nM/250 nM이 1 ul 만들어 지는 건가요..? 그렇게 만든 1ul 전체를 total volume 에 넣어줘야하는 것인가요..?
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레벨5
ʕ•ﻌ•ʔ뀨
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22.07.11 16:24
20X target primers/probe = 900nM/250nM
라는 가정이면 해당 계산이 맞습니다.
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레벨1
초초초초초보
(과기인)
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22.07.11 17:07
ddPCR 의 경우
Primers 와 Probe의 비율이 상관이 없나여..?
보통 5:5 로 계산해도 되나요??
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레벨5
ʕ•ﻌ•ʔ뀨
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22.07.11 17:34
제가 ddPCR은 해본적이 없지만....
1:9를 하던 5:5를 하던 최종으로 들어가는 농도는 900nM/250nM으로
농도가 정해져있기때문에 비율은 상관없을꺼같아요