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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 gel extraction 시....
알사랑  | 2009.03.16 16:33
gel extraction 할 때 최소한으로 들어가는 DNA의 양은 어느정도 loading해야하는지 궁금합니다.

restriction enzyme 처리를 한 후 vector에 ligation를 하기 위해 gel extraction 을 하려하는데 어느 정도의 DNA를 loading 해서 전기영동 한 것을 gel extraction해야하는 궁금합니다...

그리고 agarose gel electrophoresis 한 밴드를 가지고 DNA양을 측정하는 방법도 있는걸로 아는데 어떻게 하는 건지....그것도 알려주시면 감사하겠습니다~^^;
#gel extraction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2009.03.16   
재수 없어서 extraction할때 50%를 날린다고 가정하고, ligation할때 100-500ng 사용한다고 계산하면 최소 1ug의 band가 gel에 있으면 되겠네요.
단, 그 DNA가 plasmid에 있는걸 얻는거라면, 만일 plasmid의 크기가 4kb이고 insert가 1kb라면 총 5ug을 잘라야 insert로 사용할 1ug의 DNA가 gel에 있는거네요.
이런 식으로 계산하세요.

그런데 너무 많은 DNA를 자르면 partial cut이 생기고,
elution할 band랑 elution되선 안되는 band의 크기가 비슷하면 elution에 바짝 신경쓰셔야 하며 너무 많은 양으 DNA를 loading하면 다른 band 가 (눈에는 안보여도) 오염이 될 수 있으므로 조심해야 합니다.

elution하려는 DNA 밴드와 크기가 유사하며 확실히 농도를 알고 있는 DNA를 옆에 같이 걸어서 run하면 원하는 band와 알고 있는 band의 농도 비교로 elution하려는 DNA의 양을 가늠할 수 있습니다.
또는 크기와 양을 알고 있는 marker를 옆에 걸어서 농도를 비교하는 방법도 많이 쓰입니다.
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