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co-IP시 넣는 antibody의 양
레벨1 릴미 (대학원생)
안녕하세요,
co-IP 실험을 한지 얼마 되지 않은 대학원생입니다.
질문드리려는 내용이 너무 기초적인 내용인 것 같아 스스로도 부끄럽지만 protocol을 봐도 혼란스러워 질문 드립니다...
co-IP 시 넣어야 하는 normal IgG의 양과 IP에 사용하는 antibody의 양은 동일해야 하나요, 아니면 protein 양에 대한 비율만 맞으면 되나요?
저는 cell lysate를 600ug으로 잡는데 이를 만약 2:1의 비율로 나누어 400ug에는 IP할 antibody 2ug을, 200ug에는 IgG antibody를 넣고 싶다면 이 때 들어가는 IgG의 양은 1ug이 맞을까요?
그리고 이렇게 2:1로 실험해도... 되나요? 만약 heavy chain이 detection 된다면 두께도 2:1이 되니 이렇게 해서는 안되는 건가요?
그렇다면 cell lysate를 1:1로 나누어 진행하면 될텐데 300ug의 protein에 대해 IP antibody와 IgG antibody에 각각 2ug 정도로 같은 양의 antibody를 넣어야 하나요?
답변 부탁드립니다....
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