실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
Cloning 관련하여 질문 부탁드립니다.
레벨2 호기심천국1 (대학원생)
현재 cloning을 계획중에 있는데, 사용할 벡터가 pBBR1MCS-2 입니다.
이 벡터는 lacZa 내에 MCS가 존재하는데, 여기서 궁금증이 생겼습니다.
1. lacZa 자체의 개시코돈으로 인해 MCS에 내가 원하는 gene을 넣더라도 lacZa gene의 앞부분이 발현되어 원치않는 아미노산들이 생성되지 않을지 궁금합니다.
2. 제가 MCS 내에 RBS+원하는gene서열(ATG~~~~)을 넣으려고 하는데, lacZa의 개시코돈으로 인해 RBS 부분까지 발현되어 단백질이 이상하게 발현되지 않을지 걱정됩니다.
질문을 적다보니 결국 lacZa의 ATG를 어떻게 고려해주어야 하는지가 큰 고민거리인 것 같습니다(또한 lacZa의 ATG로부터 시작이면 넣어줄 gene의 frame 또한 고려해주어야 할까요...?).
긴 글 읽어주셔서 감사드립니다!
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