- 1mM을 처리해도 24시간 후 viability 40% 이하가 나옵니다.

 

- 현미경으로 관찰해도 무처리군과 처리군의 cell 모양이 동일한가요?

- 네 아무리 생각해도 농도가 높아서 이상합니다ㅠㅠ serum free 배지로 처리했을땐 20mM부터 600mM까지 전부 약 80%로 떨어지더라구요.. (농도의존적이지 않은 것도 의아한 부분입니다)

- 네 셀 모양은 비슷했습니다..

- cell 자체 문제 혹은 10% Serum이 들어간 배지인 것이 원인일 수도 있을까요..?

- serum +, -의 차이가 조금 나지만 질문에 나온 정도의 viability가 나오지는

않습니다.

 

- 6%면 1M이 넘는 농도인데 뭔가 간단한 실수가 없는지 확인해 볼 필요가

있을 것 같습니다.

에탄올 증발이 원인일 수 있을 듯 해서 뚜껑 닫힌 플라스틱 통에 에탄올 담긴 dish를 같이 넣어두는 방법도 시도해보았지만 마찬가지입니다,..

세 번이나 실험을 진행하였는데 아무리 생각해도 딱히 다른 실수가 있을 것 같진 않습니다ㅠㅠ plate에 parafilm을 감아볼까도 하는데 의미가 있나 싶네요..

도움이 될 진 모르겠지만, 저는 다음 내용을 고려해가면서 MTT를 했었습니다.

 

- seeding하는 cell의 수

: 결과적으론 씨딩하고 총 2일을 배양하는 거잖아요?

처음에 씨딩할 때 셀을 많이 깔면, 샘플을 고농도로 처리해도

이틀 지나고 셀이 많이 자라 있어서 MTT 처리하고 결과를

비교하고자 했을 때 처리하지 않은 실험군과

차이가 크게 나지 않을 수도 잇지 않을까요? 뭐 물론 에탄올을 고농도로

처리하셨으니 중간에 많이 죽었을 수 도 있겠지만...

무튼 그래서 전 처음에 씨딩해 주는 셀 수도 많지 않도록 해줍니다

 

- MTT 시약 농도와 처리해 주는 시간

:  MTT 시약을 저는 최종 농도가 0.1mg/ml이엿나 0.1ug/ml이엿나 기억이

자세히 안나는데, 무튼 너무 높지 않게 해줍니다.

처리해 주는 시간도 4시간 처리하는걸 논문 등에서 많이 봣는데, 전 2시간

좀 많으면 3시간 처리해줍니다. 결국 mtt 시약을 사용해 formazan의

흡광도를 측정하는 거고, 흡광도 값에 비례해서 cell의 생존률을 나타내고자

하는건데, mtt 시약의 농도가 높거나 오래 처리해줘서 formzan이

많이 생기면 비교하기가 어려워서 이 두 가지를 고려해서

실험을 진행하곤 햇습니다. 

 

제가 적은게 정확하지 않을 수 잇지만, 작성자님께 도움이 됏으면 좋겟네요