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 전체 > Cell Biology > Viability
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질문 Ethanol 처리시 cell이 죽지않는 이유
알Jdjdidde(대학생)  | 06.29 23:28
Mtt로 간암세포의 viability를 확인하고 있습니다.

1. Hepg2 cell을 96well에 씨딩, 24시간 배양
2. 에탄올 처리하여 24시간 배양
3. mtt 처리
의 순서로 진행 중입니다

6%의 높은 농도까지 사용했는데도 viability가 떨어지지 않습니다.. 이론상 말이 안되는 것 같은데 무엇이 문제일까요..?

Culture 및 희석에는 MEM 배지 사용하였고,
6% etoH로 처리하고자 하는 경우에는
100% absolute ethanol을 60%로 희석하여,
MEM배지 180ul + 60% etoH 20ul
처리하여 최종적으로 6%가 들어가게 하였습니다.

도움 부탁드리겠습니다ㅜㅠ
#Cell
 
#Mtt
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  06.30 09:02  

- 1mM을 처리해도 24시간 후 viability 40% 이하가 나옵니다.

 

- 현미경으로 관찰해도 무처리군과 처리군의 cell 모양이 동일한가요?

알Jdjdidde  |  06.30 10:08  
- 네 아무리 생각해도 농도가 높아서 이상합니다ㅠㅠ serum free 배지로 처리했을땐 20mM부터 600mM까지 전부 약 80%로 떨어지더라구요.. (농도의존적이지 않은 것도 의아한 부분입니다)

- 네 셀 모양은 비슷했습니다..

- cell 자체 문제 혹은 10% Serum이 들어간 배지인 것이 원인일 수도 있을까요..?
대왕개구리SPEED  |  06.30 10:14  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- serum +, -의 차이가 조금 나지만 질문에 나온 정도의 viability가 나오지는

않습니다.

 

- 6%면 1M이 넘는 농도인데 뭔가 간단한 실수가 없는지 확인해 볼 필요가

있을 것 같습니다.

알Jdjdidde  |  07.03 12:37  
에탄올 증발이 원인일 수 있을 듯 해서 뚜껑 닫힌 플라스틱 통에 에탄올 담긴 dish를 같이 넣어두는 방법도 시도해보았지만 마찬가지입니다,..

세 번이나 실험을 진행하였는데 아무리 생각해도 딱히 다른 실수가 있을 것 같진 않습니다ㅠㅠ plate에 parafilm을 감아볼까도 하는데 의미가 있나 싶네요..
개구리YTB  |  07.03 22:37  

도움이 될 진 모르겠지만, 저는 다음 내용을 고려해가면서 MTT를 했었습니다.

 

- seeding하는 cell의 수

: 결과적으론 씨딩하고 총 2일을 배양하는 거잖아요?

처음에 씨딩할 때 셀을 많이 깔면, 샘플을 고농도로 처리해도

이틀 지나고 셀이 많이 자라 있어서 MTT 처리하고 결과를

비교하고자 했을 때 처리하지 않은 실험군과

차이가 크게 나지 않을 수도 잇지 않을까요? 뭐 물론 에탄올을 고농도로

처리하셨으니 중간에 많이 죽었을 수 도 있겠지만...

무튼 그래서 전 처음에 씨딩해 주는 셀 수도 많지 않도록 해줍니다

 

- MTT 시약 농도와 처리해 주는 시간

:  MTT 시약을 저는 최종 농도가 0.1mg/ml이엿나 0.1ug/ml이엿나 기억이

자세히 안나는데, 무튼 너무 높지 않게 해줍니다.

처리해 주는 시간도 4시간 처리하는걸 논문 등에서 많이 봣는데, 전 2시간

좀 많으면 3시간 처리해줍니다. 결국 mtt 시약을 사용해 formazan의

흡광도를 측정하는 거고, 흡광도 값에 비례해서 cell의 생존률을 나타내고자

하는건데, mtt 시약의 농도가 높거나 오래 처리해줘서 formzan이

많이 생기면 비교하기가 어려워서 이 두 가지를 고려해서

실험을 진행하곤 햇습니다. 

 

제가 적은게 정확하지 않을 수 잇지만, 작성자님께 도움이 됏으면 좋겟네요

 

 

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