실험 Q&A Microbiology > Bacteria
essential gene deletion할때 질문 있습니다.ㅜ
레벨2 김세은1 (대학원생)
3개월된 학부 연구생인데요 먼저 essential gene(e.coli) 에 kan 내성유전자가 포함되어있는 frt를 transformation시켜서 deletion시키는 실험을 진행하고 있습니다.
먼저 사용하는 gene은 pkd46을 넣은 상태입니다. 그렇다면 transformation 후 regeneration시킬때 람다red recombinase를 발현시키기 위해서 arabinose를 넣은 후 30에서 배양해야 하나요?
또한 regeneration 후 spreading하고 나서는 pkd46이 날아 갔으니 이 plate는 37도, arabinose가 없는 배지에서 배양하는 것이 맞나요?
그리고 essential gene deletion시키는 일이 원래 잘 안되나요..? 몇개월째 같은 실험 반복중이어서 잘못된게 있나 싶습니다.
도와 주시면 감사하겠습니다.
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