1) IL 관련 구매를 하면 기본 protocol  이 있는 sheet 지가 오는 것으로 알고 있는데, PBS 로 IL 을 녹이고, sheet 지에 있는 information 으로 분주 하여 -80℃ deep freezer(현 연구실 freezer set -70℃) 해도 상관 없는 건가요? 

->cytokine은 아주 고가에요.. 인위적으로 합성한 단백질 이기 때문입니다. 또한 활성도 나타내야 하기때문에 소량이어도 아주 비쌉니다. 그리고 cytokine은 보통 단백질과는 다르게 Unit 단위로 처리해야 하는 경우가 많습니다. 꼭 프로토콜 숙지후 stock을 만들어 두시길 추천드려요.

https://www.peprotech.com/en/recombinant-human-il-2

가장 많이 사용하는 제품입니다. 보통 50ug 짜리를 많이 구매해서 분주 합니다.. 분주는 많은 양을 하는것이 아니라 50ml 미디어에 한번 넣어 줄만큼 분주해서 두는것이 가장 좋습니다. -70도 무관합니다. 

2) IL-2 계열은 가장 fresh 한 instruction 이 그때그때 만들어서 사용 하라는 논문을 봤는데, DMEM(FBS10%+P/S 1%) 배지에 녹인 IL-2 를 섞어놓고 사용 하는건가요?

-> 맞아요.. 그때 그때 쓸만큼 만드는것을 추천드리며, 너무 최소 볼륨은 하기 힘드니 보통은 50ml 기준으로 많이 만듭니다

PBMC 후 culture medium 에 cell 을 처리 한 후 IL-2 를 protocol 양 많큼 후처리 하라는 것을 봤는데, 크게 상관 없는 순서 인가요? 

-> IL-2 자극을 후에 줘야 한다면 뒤에 넣어야 겠지요... PBMC로는 여러 면역 세포로 분화를 유도 할수 있고, 그 분화가 유도 된것의 활성을 어떻게 나타내주냐에 따라 IL-2 주는 시간때가 다를수 있어요... 보통 NK92 세포주 같은 경우는 IL2를 계속 함께 넣어주어야 살지만, T세포는 IL-2가 들어가면 활성화가 일어나 세포수가 불고.. 너무 활성화 되면 죽기 때문에.. 시점이 중요합니다.

3) deep freezer 한 IL-2 를 녹일때 37℃ set 한 water bath에 녹여주면 되는건가요? DMEM 처럼 적정 온도가 도달할때 까지 놔야 하나요? 액상으로 돌아오면 바로 그냥 사용 해도 되는건가요? 

-> 아주 소량씩 분주해 놓기 때문에 잠시 꺼내 오는 사이에 녹을수 있어요.. (보통 10ul씩 분주 하기도 합니다) 그럼 바로 쓰시면 되구요.. 볼륨이 많아 안녹으면 아이스에 박아 놓고 천천히 녹이시면 됩니다.. 그후 pre warming 된 배지에 첨가해서 사용하시고, IL-2가 들어가서 만들어진 배지가 남았다면 냉장 보관하시고 빨리 소진하세요..(기간은 사람마다 조건마다 다르지만 보통 일주일을 넘기면 버립니다.)