[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
한국애질런트
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 신미경 교수
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 510  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 웨스턴 고수님들 도와주세요ㅜㅜ
올챙이열두시삼십분(대학원생)  | 06.27 17:15

너무 답답해서 여기다가 올립니다.

보통 웨스턴 진행을 하고 transfer를 하잖아요?! 근데 transfer 후 membrane에 marker가 윗 부분만 남고 아래는 다 사라졌어요,, gel에도 marker가 안 남아있었어요,, 그럼 다 membrane에 옮겨가는 게 원래 맞는 거 아닌가요?! 왜 사라졌을까요 ㅠㅠ 아주 희미하게 옮겨갔는데 제가 못 보는 걸까요? 혹시  저같은 경험 가지신 분 계신가용? 실험 초짜라 이래저래 실수도 많이 해서 넘 답답하네요,,,

이렇게 될 경우 protein도 detection이 되지 않을 가능성이 높나요?!

 

지금까지 해오던 과정이랑 똑같이 했는데 이번엔 왜 저러는지 알수가 없네요 ㅠㅠ transfer 시간도 길게 잡아주고 sandwich도 잘 만들어서 했는데,,,,

#transfer
 
#western blot
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리지나가는 생물학자  |  06.27 17:18  

젤은 몇프로인지.. 트랜스퍼 조건은 어떠한지.. 알려주셔야.... 알려드릴수 있지 않을까요??

올챙이열두시삼십분  |  06.27 17:20  

젤은 10%로 만들어서 진행 했고, 트랜스퍼는 100V에 2시간 진행 하였습니다. 이전에도 똑같은 조건에서 진행을 했는데 그 때는 marker가 잘 나왔는데 이번엔 마커가 사라졌네요ㅜㅜ,,, 딱 맨 위에 250kDa 짜리 하나만 나왔습니다,,

개구리지나가는 생물학자  |  06.27 17:25  

100V에 2시간인데 그전에는 잘 나왔나요?? 열이 나지는 않았나요??

보통 10프로 젤은 70~90V 한시간이 적당합니다..(물론 실험실에서 쓰는 기기마다 다르긴 합니다만... 저정도는 아니에요)

2시간을 넘기는 트랜스퍼는 150이상 사이즈를 다 넘겨주기 위함일 경우가 많아요...

아래 사이즈는 다 나갔을 가능성이 있어요..

마커를 로딩하고 트랜스퍼를 시간별로 확인해 보세요.. 1시간, 1시간 반, 2시간 이렇게 확인해 보시면 더욱 정확하게 아실수 있어요.. 

젤 한장에 마커만 한 3개 걸고 잘라서 각각 트랜스퍼 해보세요.. 

실험은 뭐든 잘 경험하고 그 경험으로 배우는거니.. 많이 해보시고 습득하세요.

올챙이열두시삼십분  |  06.27 17:33  

넹,, 그 전에 똑같은 조건 (100V, 2시간)에서는 잘 나왔습니다..!! 제가 사이즈가 큰 protein을 관찰해야 해서 시간은 저 정도 넉넉히 잡았구요 ㅠㅠ

 

발열 문제 역시 아이스팩 넣고 밖에도 얼음으로 둘러줬습니다. ㅜㅜ 

그럼 marker가 membrane에 잘 안 넘어왔다고 하면, protein 역시 detection 되지 않을 확률이 높을까요?! 

또 gel에 마커가 정말 하나도 안 남겨져 있는데 membrane을 뚫고 흘러간 걸까요?ㅜㅜ

 

이런 경험은 처음이라 너무 당황스럽네요. ㅜㅜ

대왕개구리SPEED  |  06.27 18:02  

- 만약 시간이 길었다면 저분자는 membrane 반대로 넘어갑니다.

 

- target 분자량이 얼마인지 모르겠지만 90분 정도면 충분하지 않을까

보입니다.

 

- 현재 상태에서 고분자는 잘 나올것 같은데 internal STD가 나올지는

실험해봐야 알수 있을 것 같습니다.

 

- membrane을 폰슈 염색을 한번 해보세요.

올챙이열두시삼십분  |  06.27 18:31  
감사합니다. ㅜㅜ
경험상  |  06.29 22:58   

가끔 실수로 +- 반대로 꼽거나 젤 메브레인 반대로 위치 시킨면 열때문에 마커가 조금 넘어 간것 처럼 보일때도 있습니다. 저도 10년넘게 웨스턴했지만 가끔 아주 가끔 한번씩 뭐에 홀린것처럼 이런 실수를 합니다. 또 가끔 회사마다 +-색깔이 반대인 기계들도 있으니 잘 확인해 보세요

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN한국공인대리점] 22주년 TWO-TWO 맞이 할인이벤트_liquid handler 실험실 자동화.. (12.31까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN 한국공인대리점] TECAN Microplate reader/ IMPLEN Nanophotomet.. (12.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
DeNovix DS-11FX+ 하나의 장비로 Absorabance(Micro-volume, Cuvette)와..
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
MIC-2 Real time PCR 5대 한정 할인행사! (12.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
MGB Probes, LNA oligos도 Biosearch Technologies와 함께하세요
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
Novogene과 함께하는 신나는 여름휴가 이벤트 (12.31까지)
최근등록   더보기 >
젖당 오페론 실험   08.08
액체 배양 진탕배양과 정치배양   08.07
immunization 시 조건   08.07
생쥐 행동실험   08.07
LightCycler 96 software   08.07
중금속시험 PPM 계산 질문좀요   08.07
Antigen retrieval 전자레인지   08.07
Mouse Brain Paraffin section IF staining 섹션 두께   08.07
유산균 접종 발효시킨 우유 배지 배양   08.07
항생효과 실험 때 시료액 만드는 법   08.06
최근답변자 우수답변자
개구리세오

알djfuqekwls..

개구리크옷

개구리범수리

대왕개구리SPEED

올챙이pico

알허브민트

알afffdfdee

대왕개구리SPEED

개구리처음처럼

개구리ryan

개구리절대교주

꽃개구리아라곤

꽃개구리bio

개구리propadrum

개구리Daegu*

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
진스크립트 광고