실험 Q&A Microbiology > Yeast
pcr 관련 질문드립니다
레벨1 ssonsson (대학원생)
4.5kb band pcr을 진행중인데 band가 전혀 뜨지 않습니다.
pcr 조건은
pre-denaturation 95도 2분
denaturation 95도 30초
annealing 은 primer tm 보다 10도정도 낮게 30초
retention time 5분
총 30cycle진행했습니다.
pcr을 총 8번 정도 진행하면서, annealing tm, taq pol, dNTP, buffer도 바꿔가면서 진행했고, genomic DNA도 새로 뽑아서 진행해봤습니다.
어디서 가장 큰 문제가 있었을까요?
그리고 추가적으로 primer 농도가 높게 들어가면 결과가 잘 안나올 수 있나요?
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