안녕하세요, 

브릭에 계신 연구자님들께 조언을 듣고 싶어서 질문을 올립니다. 

다름이 아니고 저희가 헤테로 마우스끼리 교배해서 낙아웃 마우스 제작 중에 있는데, 확률 상 1/4인데도 낙아웃 마우스가 너무 나오지 않아서 문의 드립니다. 

현재 저희 연구실에서는 헤테로 마우스끼리 교배한 새끼들을 toe cutting 하여 genomic PCR로 유전자형을 분석하고 있습니다. 

저희가 쓰는 primer가 WT reverse, WT forward, KO reverse, KO forward 총 4개이고, 이 4개의 primer를 사용하여 PCR을 하면 KO band만 관찰 되는데, 더블 체크를 위해서 동일한 샘플에 WT primer만 사용하여 PCR을 다시 하면 예상대로는 아무 band도 관찰이 안 되어야 하는데 (된다고 해도 100 kda 이하의 nonspecific band) WT band가 선명하게 관찰 되어서 이러한 현상을 문의 드리고자 합니다. 

교배 상에서 헤테로만 나오는 것인지, 아니면 PCR 시 어떠한 문제가 있어서 KO 마우스 판독이 불가능한 것인지 문제점을 모르겠어서 혹시 이런 부분에 조언 주실 것 있으면 마음껏 해주시면 감사드리겠습니다.... ㅠㅠ