실험 Q&A Cell Biology > Differentiation/Proliferation
Flt3L을 이용한 Bone marrow cell culture (Dendritic cell 생성)를 아시는 분 계실까요
레벨5 아이이이잉 (대학원생)
안녕하세요,
박사과정생으로 이번에 Dendritic cell에 대해 연구를 하게 되었습니다.
기존에 Bone marrow cell을 마우스의 정강이뼈와 대퇴부에서 isolation하여 GM-CSF를 treat하여 BMDM을 만들어 사용하는 실험은 몇번 해보아서 알고 있었고,
GM-CSF를 이용한 BMDC 생성법도 알고 있었는데요,
이번에 https://doi.org/10.1016/j.immuni.2020.04.005 라는 논문에서 보게된
Flt3L을 이용한 BM culture방법을 사용하여 DC를 만들고 싶어, article에 있는 methods를 그대로 따라서 해 보았는데.. 완전히 실패하였습니다.
위 논문에 쓰인 protocol을 간단히 설명드리면,
BM뽑아서 RPMI (10%FBS, 2mM L-glutamine, b-mercapto, Flt3L)에 3일간 culture후 3일째에 OP9 cell과 합쳐 co-culture하라고 되어 있는데요,
문제는 OP9 cell과 합치기도 전인 3일째에 cell들을 harvest하여 FACs로 확인해보니 대부분의 BMcell이 죽었다는 것입니다.
BM cell의 survival에 도움을 주는 GM-CSF가 전혀 들어가지 않아서 그런것인가 추측만 할뿐인데, 논문 저자들은 어떻게 실험을 했는지 알수가 없어서...
1저자 2저자 연락처를 찾아보려고 노력도 했는데 도저히 연락할 방법이 없더군요.
3일째에 그래도 얼마 안되는 cell이라도 살아있으니까 OP9 cell과 합쳐 보았는데, 오늘 5일째 FACs를 확인해보니 조금 살아있는 cell이 늘긴 했습니다만 이 역시 너무 적습니다. 이렇게 되는게 정상인것 같지도 않고요...
혹시 이 실험방법과 관련하여 경험이 있으시거나 지식이 있으신 분이 계시다면 조언을 해주시면 정말 감사하겠습니다.
긴 글 읽어주셔서 감사합니다. 좋은하루 되세요.
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