실험 Q&A Cell Biology > Transfection
siRNA-PEI nanoparticle encapsulation (gel retardation assasy) 문의
레벨1 aba1594 (대학원생)
branched PEI (25KDa)과 siRNA (dsRNA, 20bp)를 이용해 nanoparticle을 만들고자 하는데요,
150mM NaCl, 10mM HEPES buffer에 siRNA와 bPEI를 각각 녹인 후, N/P ratio를 1에서 200까지 바꿔가며 nanoparticle 제작을 시도했고,
NP 제작이 되었는지 확인하기 위해 2% agarose gel에 gel retardation assay를 진행했습니다. (SYBR Safe, TAE 0.5X)
문제는, 보통 다른 실험 논문을 확인해보면 N/P=5 정도에서 대부분의 siRNA가 encapsulation 되는 것을 확인할 수 있는데,
제가 진행한 assay에서는 N/P=200에서도 제대로 encapsulation 되지 않는 것 같습니다.
왼쪽 lane부터 순서대로 naked siRNA, N/P=1, 2, 5, 10, 40, 100, 200입니다.
siRNA-PEI particel preparation protocol도 충실히 따라한 것 같은데, 왜 이런 문제가 생기는걸까요?
경험자분들의 많은 조언 부탁드립니다.
감사합니다.
Bio마켓 프리미엄