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안녕하세요!
우선 위에 글에서 궁금한 것이 단백질 induction한 후에 확인하신 건가요? 아니면 GST fusion단백질을 purification하고 나서 SDS-PAGE에서 확인하신건가요?
우선 induction에서 그렇게 나타났다면 혹시 Stop codon을 넣으셨으면 GST가 C-term에 있는 경우에는 GST 단백질이 빠진 본래의 70kDa가 발현될 것 같긴 하네요. 이 경우에는 GST가 없기에 purification이 안될 듯 하네요.
만약 purification을 하였는데도 70 kDa가 나온다면 아마도 unstable한 부분에서 cleavage가 일어나거나 degradation이 될 수도 있을 듯 하네요. Construct sequence에 mutation이 없고 정상적으로 cloning 되었다는 전제 하에,
저도 GST fusion단백질을 많이 뽑고 있는데, GST와 제 단백질 사이의 linker 부분에서 cleavage가 일어나는 경우가 많이 있습니다. 제 경우에는 GST부분은 stable하여 좀 빵빵하게 나오는 편이고, 제 단백질은 unstable한 경우가 많아 단백질의 양은 적거나 안보이는 경우가 많습니다. 그래서 밴드가 2개나 3개가 나타나기도 합니다. Western blotting하면 잘 detection되구요. 혹시 GST나 GST보다 약간 높은 부분에 Band가 나타나나진 않나요?