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사진보면 마커가 젤에 남아있는거 아니예요...? 제가 잘못본건가요..?
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레벨4
experiment
(대학원생)
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22.06.08 22:08
아뇨 membrane에 다 옮겨 졌어요!
어...지금 보면 초록색 윗 밴드 정도까지만 transfer 됐는데...제 경험으로 보면 12퍼센트 안팎의 젤에 내리신거같고 마커는 대충 30-40kda 어드메의 위치인거같거든요..? 물론 아닐 수도 있지만 제 눈엔 그래보여서 대충 말씀드려요...
근데 처 초록색 위의 파란색보다 더 위는 하나도 트랜스퍼가 안되서...트랜스퍼 자체가 잘 안된걸로 보여요 전...사이즈 얼마짜리를 디텍션하시는건가요?
트랜스퍼에 문제가 있고 폰슈 염색사진 있나요?
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레벨4
experiment
(대학원생)
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22.06.09 04:39
폰슈 염색 사진은 안 찍었지만 5분 넘게 염색해도 마커 제외한 어느 공간에서도 band는 안보였어요,,
저도 전기영동도 잘 진행된듯 하고 분명 transfer과정에서 문제가 있는것 같아서 모든 과정 재검토 중인데, 혹 transfer가 잘 되면 gel에 band는 육안으로 확인이 안되지만 maker도 완전히 다 membrane으로 넘어가나요??
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레벨1
Q.E.D.
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22.06.09 07:34
Transfer step에서 문제가 있습니다.
현재 gel에서 큰 사이즈들은 하나도 넘어가지
않은 상태입니다.
전에 퐁슈를 찍어둔 사진이 있어 첨부합니다.
transfer후에 gel에 마커가 남아 있으면 않 됩니다.
참고로, 위 membrane은 PVDF 입니다.
- 폰슈에서 band가 안보이면 transfer가 안된 것으로 봐야 하며 이런 경우
gel을 염색해서 남은 band를 확인하는 것이 좋습니다.
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레벨4
experiment
(대학원생)
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22.06.09 22:14
답변 감사합니다ㅜㅜ
제 경험상 PVDF는 폰슈 잘 안 되던데요....
NC는 잘 됩니다.