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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 cell supernatant protein을 western blot으로 보려고합니다
알민초초(대학원생)  | 06.07 17:43

안녕하세요,

cell supernatant에 분비되는 단백질을 western blot으로 보려고 합니다.

농축한 후 보려고 하고있지만, 그 전에 우선 cell supernatant를 조금 취하여 gel에 내려보려고 합니다.

 

아래대로 진행하면 될까요?

 

1. cell supernatant를 취한 후 centrifuge를 돌린 후 상층액을 취한다. (debris, 죽은 cell 제거)

2. heat-denaturation한다.(95'C, 5분)

3. supernatant와 6x loading dye를 섞은 후 gel에 loading한다.

 

더 필요한 step이나 수정해야할 부분이 있으면 알려주시면 감사하겠습니다!

#western blot
 
#supernatant
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
123  |  06.07 18:08   

순서를 수정할 필요가 있네요. (경험상 문제는 없었습니다만)

sample buffer에 protein을 denature시키는 SDS와 BME가 들어있으니 sample buffer 넣고 heating 하세요.

시간은 95'C면 2분 정도도 충분하니 5분을 꼭 지키실 필요는 없어요.
(급하면 조금 덜 해도 된다는 의미입니다. heating 시켜놓고 assembly 조립하면 얼추 시간이 맞을겁니다.)

FBS 포함된 media라면 serum band가 엄청 진하게 나오니 감안하시구요.

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