[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
기산바이오(주)
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
배양육 연구동향: Meat the Future
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 392  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Western blot sample preparation protocol 중에 질문이 있습니다.
앞다리쥬뗌므(대학생)  | 06.02 10:45

보통 6 well에 seeding 한 cell에 drug를 24시간 treat하고 난 뒤, western blot sample을 준비합니다. 

(1). 죽은 cell까지 harvest하기 위해, media를 suction하지 않고 media는 걷어서 1.5 ml tube에 모읍니다.

(2). 10000 rpm에서 30 sec - 1 min 동안 centrifuge를 하여 pellet이 만들어 지도록 합니다.  

(3). media를 suction한 후, cell pellet을 ice에 박아둔 뒤 

(4). 6 well에 부착되어 있는 cell에 lysis buffer을 넣어서 lysis 되도록 놔둔 후, 스크래퍼로 cell을 긁습니다. 그리고 (3)번 cell pellet에 함께 넣어 cell이 잘 lysis 되도록 피펫팅을 여러번 합니다. 

(5). 4도씨 냉장고에 10분간 넣어두거나 ice에 박아둔 상태로 30분간 놔둡니다.

(6). 12000 rpm ( 또는 13000 rpm )에서 10분 또는 15분 동안 centrifuge를 한 후 pellet이 생기도록 합니다. 

(7). pellet은 건드리지 않고 최대한 상층액을 따서 새로운 e-tube에 모아둔다. 

(8). 오늘 단백질 정량을 할 예정이면 냉장고에 두고 나중에 할 예정이면 -80도에 보관해둡니다. 

 

혹시 여기서 보완해야 할 점이 있을까요? 

#western blot
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
123  |  06.02 10:57   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

보완할 점은 아니고 이런 방법도 있다 소개해드립니다.

cell을 그냥 western blot 용으로만 사용할거라면

media wash 후 lysis buffer 말고 그냥 물 넣고 긁어서 cell harvest 한 다음 바로 SDS sample buffer 넣어서 sampling해도 됩니다.

앞다리쥬뗌므  |  06.02 11:05  

답변 감사합니다 :) 

 

혹시, 하나를 더 여쭤본다면, 

Media를 걷어서 centrifuge를 시킨 cell pellet (dead cell)과 well에 부착되어있는 cell 따로 lysis 시켜서 합치는게 좋은지 

아니면 제가 쓴 방식대로 합쳐서 lysis 시키는 것이 좋은지 궁금합니다. 

 

ㅇㅇ  |  06.02 12:10   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

세포에 따라 미디어 상태로 긁어서ep tube 옮겨서 워시하고 라이시스 하기도 합니다

대왕개구리SPEED  |  06.02 12:17  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 부착 세포의 경우 죽거나 부착되지 않은 cell은 사용하지 않는 것이 좋습니다.

123  |  06.02 14:27   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

윗 분 말씀처럼

dead cell은 특별한 목적이 있는 게 아니라면

어떤 assay를 하든 사용하지 않습니다.

그건 WB도 마찬가지입니다.

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
전자동 DNA/RNA 추출 장비
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN 한국공인대리점] TECAN Microplate reader/ IMPLEN Nanophotomet.. (12.31까지)
인성크로마텍 인성크로마텍
[Newomics] M3 Emitter®: LC-MS 감도 향상을 위한 마이크로플로우 LC-나노스프레이 이온..
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
Celloger Mini Plus를 사용하여 세포 수준의 모든 실험을 처리해보세요!
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN No.1 공식대리점] 2주년 고객 감사 이벤트_20% 한정 세일 판매 (9.30까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN한국공인대리점] 22주년 TWO-TWO 맞이 할인이벤트_liquid handler 실험실 자동화.. (12.31까지)
최근등록   더보기 >
생1 실험 주제   08.19
특정 관심 유전자에서 보고된 SNP를 검색할 수 있는 database   08.19
이미다졸50mM 100mM 250mM 만드는법?   08.19
샘플 및 독성 물질 처리 후 시간 기준   08.19
FRAP assay 결과값 정리   08.19
가수분해물 단백질분말 관련 질문있습니다.   08.19
인간각막상피세포(Human Corneal Epithelial Cell) 가지고 계신분 있으...   08.19
면역침전 stst3 dimer 형성   08.19
Sio2 표면에 bonding된 APTES 제거하는 방법   08.19
TEM image sampling   08.19
최근답변자 우수답변자
개구리크옷

알CUMB

알아미노펜

앞다리oneday

대왕개구리SPEED

알크리스12

알대학원졸업희망

올챙이슬픈달걀

꽃개구리visavis

개구리Kim

개구리냥냥아빠

개구리flu...

꽃개구리Jake

꽃개구리착한사람

개구리secu

개구리식스센스

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
진스크립트 광고