실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
Western blot sample preparation protocol 중에 질문이 있습니다.
레벨5 쥬뗌므 (대학생)
보통 6 well에 seeding 한 cell에 drug를 24시간 treat하고 난 뒤, western blot sample을 준비합니다.
(1). 죽은 cell까지 harvest하기 위해, media를 suction하지 않고 media는 걷어서 1.5 ml tube에 모읍니다.
(2). 10000 rpm에서 30 sec - 1 min 동안 centrifuge를 하여 pellet이 만들어 지도록 합니다.
(3). media를 suction한 후, cell pellet을 ice에 박아둔 뒤
(4). 6 well에 부착되어 있는 cell에 lysis buffer을 넣어서 lysis 되도록 놔둔 후, 스크래퍼로 cell을 긁습니다. 그리고 (3)번 cell pellet에 함께 넣어 cell이 잘 lysis 되도록 피펫팅을 여러번 합니다.
(5). 4도씨 냉장고에 10분간 넣어두거나 ice에 박아둔 상태로 30분간 놔둡니다.
(6). 12000 rpm ( 또는 13000 rpm )에서 10분 또는 15분 동안 centrifuge를 한 후 pellet이 생기도록 합니다.
(7). pellet은 건드리지 않고 최대한 상층액을 따서 새로운 e-tube에 모아둔다.
(8). 오늘 단백질 정량을 할 예정이면 냉장고에 두고 나중에 할 예정이면 -80도에 보관해둡니다.
혹시 여기서 보완해야 할 점이 있을까요?
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