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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 Cell이 있었는데요..없어졌습니다.. 이런경우 겪어보신분 계세요..?
알tioeoi(대학원생)  | 05.16 11:37

제가 Cell line 2개를 동시에 키우고있습니다.

Hacat는 trypsin 처리해서 Cell 떼고 Raw는 피펫팅으로만 Cell을 떼는데 주말동안 Cell 잘 자랐고 부착 잘 되있는거 확인하고 Cell을 뗀 다음 Centri를 돌렸는데..없어졌어요.. 가라앉아있는게 없어서 현미경으로 봐보니까 깨끗히 없어졌어요..

뭔가 평소랑 달랐던 점은 Cell 뗄 때 lysis한것처럼 끈적이는 느낌이 들긴했는데.. 이건 단백질이 다 깨졌다는것아닌가요..?

trypsin 처리나 물리적인 피펫팅 만으로도 단백질이 깨져버릴 수 있나요??

Cell이 엄~청 약해진 상태였을까요..? 형태는 괜찮아보였는데..ㅠㅠ

이런 경우 겪어보신분 계실까요 ㅠㅠ

#cell
 
#raw
 
#hacat
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123  |  05.16 12:12   

끈적이는 것은 DNA고 lysis됐어도 세포 잔여물이 남습니다.

따라서 spin down 후에 없어졌다면 washing 과정 중 pipette tip에 pellet이 딸려와 버려졌을 가능성이 있겠네요.

대왕개구리SPEED  |  05.16 13:05  

- 실험에 실수가 있었던것 같습니다.

 

- 다른 detach 방법으로 둘다 사라지는 것은 lysis 문제가 아닐 것으로 

보입니다.

알tioeoi  |  05.16 14:06  

문제 확인되었습니다. media 때문이더라구요 ㅠ

새로운 media만들어서 Cell 다시 풀어보고, 기존 media에도 새로 Cell 풀어봤는데 새로운 media에 푼 cell은 정상처럼 있었는데 기존 media에 푼 Cell은 흔적도 없이 사라져있네요 ..ㅠㅠ어떻게 순식간에.. Cell 푼 양도 같고 media 조성도 같은데 기존 media 만든지는 한 6일정도 되었거든요..!

정말..신기한 경험이고..찝찝하네요..ㅠㅠ

일단 원인은 찾았습니다..답변감사합니다 ㅠㅠ

개구리안녕난세포야  |  05.20 18:15  

처음보는 경우네요.. 끈적이는게 크로마틴질이라면 핵까지 깨질 정도의 뭔가가 들어갔다는건가요 원인은 찾아서 다행이네요

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