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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 웨스턴고수님들!! ) 모든 샘플에서 동일한 잡 밴드가 떠요!! help
웨스턴 미오  | 2009.03.07 09:58
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
웨스턴시 모든 샘플에서 35kDa 쯤 동일한 밴드가 뜹니다.
다른 밴드(타겟) 도 잘 나옵니다.
혹시 항체문제인가 싶어서, 다른 샘플도 전체 멤브레인 걸어보니
다른 항체로요.
역시 35쯤에서 진한 밴드가 뜹니다.
워싱 심하게 해줬더니, 밴드가 expose 진하게 된것 처럼, 눈에 노랗게 타버렸네요

버퍼오염인가 해서, (sample buffer제외하고)
전기영동, 트랜스퍼 버퍼, aps, TEMED등은 모두 바꾸었는데.
역시 마찬가지네요.

단순히 워싱이나 BLOCKING (5% BSA in TBST: 1시간) 문제가 아닌것 같아요.

샘플버퍼문제일까요? 죽겠네요..ㅠㅠ..
보고자하는 밴드는 잘 뜨는데, CONSTRUCT 사이즈가 다 달라서, 홀 멤브레인 다 봐야거든요...ㅠㅠ.

도와주세요
#웨스턴
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리ryan  |  2009.03.07   
construct라고 말씀하셨으니, 아마 tagging을 시킨 후 tagging antibody로 아서 확인하시는것 같은데,,

혹 flag를 사용하시는 것이라면, titer가 높을 경우 backgroud band로 진한 band가 뜹니다.

한번쯤 primary antibody의 titer를 확 낮춰서 아보세요.
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