실험 Q&A Immunology > ELISA
competitive elisa standard absorbance으로 엑셀 standard curve 및 샘플 농도 계산
레벨1 notorious choi (과기인)
안녕하세요.
competitive elisa kit를 이용하여 실험한 결과,
standard의 농도는 0, 0.15, 1, 5, 20, 70입니다.
흡광도는 1.050, 0.825, 0.598, 0.336, 0.219, 0.130입니다.
kit 설명서에는 4-PL curve fit으로 그리던지 y축의 농도에 대해 x축의 각 standard 흡광도를 표시하여 그리라고 합니다. 데이터는 농도의 log versus 흡광도의 log를 표시함으로써 선형화될 수 있다고 합니다.
1. standard의 흡광도와 농도를 이용하여 엑셀에서 그래프를 그릴 때 지수, 선형, 로그, 다항식 중 어떤 것으로 그려야 할까요?
만약 로그로 해야 한다면 흡광도와 농도를 모두 로그형태로 바꾼 후 그려야 하나요?
2. 흡광도와 농도를 로그값으로 변경하니 대부분 샘플의 값이 음수로 바뀌고, 다항식(4차 또는 5차)로 그리면 농도 값이 터무니없이 커지거나 작아집니다..이유가 무엇일까요?
3. 유튜브에서 competitive elisa 그래프를 그릴 때 1/흡광도로 변경해서 엑셀로 그래프를 그리던데 이 방법이 맞는 건가요?
혹시 맞다면 이렇게 바꿔주는 이유는 무엇인가요?
4. 원래 reader기에서 흡광도 측정 후 농도까지 계산해주는 기계인데 실수로 인해 standard의 농도값을 잘못 입력하였습니다. 이 경우 샘플의 농도를 계산하려면 어떻게 해야할까요?
5. 마지막으로 sigmaplot 14.5를 이용하여 standard 흡광도와 농도 및 샘플의 흡광도를 통해 샘플의 농도를 구할 수 있나요?
매뉴얼을 찾아보아도 어떻게 구해야 하는지 감이 잡히지 않습니다ㅠㅠ
많은 답변 부탁드립니다..
Bio마켓 프리미엄