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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
조회 578  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Mouse brain lysate 중 perfusion여부
알2Conomy(대학원생)  | 05.11 15:40

안녕하세요,

mouse brain lysate를 이용하여 stereotaxic injection을 수행하려고 하는 석사생입니다.

Brain lysate를 만들어야 하는데 궁금한 점이 있어서 질문드립니다.

여러 논문들에서 찾아낸 brain lysate의 과정은

1. Mouse에서 Brain 적출

2. Homogenize한 뒤 Sonication

3. centrifuge하고 난 뒤 Supernatant만 사용

입니다.

여기서 Perfusion은 언급되어 있지 않더라구요.

Perfusion을 해서 피를 빼낸 후에 해야 하는건지, 아니면 있는 그대로의 Brain을 바로 homogenize하는 것인지 알고 싶습니다.

#Brain lysate
 
#Homogenate
 
#Mouse
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
wave  |  05.11 16:58   

논문에 기본적인 실험 방법은 기재되지 않는 경우가 많습니다.

perfusion은 brain 적출 전에 합니다.

개구리Q.E.D.  |  05.11 19:51  
위 글에서 질문한 순서가 맞는지 궁금합니다.
brain lysate를 가지고 다른 쥐의 머리에
주입을 하겠다는 말인가요?
개구리토라  |  05.16 10:36  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Brain lysate를 가지고 Stereotaxic 하실거면 Perfusion 안하는게 베스트일 것 같습니다. 논문 잘 찾아보시면 설명된것도 있을거고 안된 것도 있긴할텐데,

저희도 비슷한 걸 해서, 어떤 실험을 하시려는건지 짐작은 가는데

저희는 단백질을 따로 정제해서 하는거라 약간 다릅니다만은..

Perfusion 하는 이유는 사실상 Western이나 IHC 할때 피에 의한 Background가 더러워지거나, Non-specific이 뜨는걸 최소화하기 위해 하는거라서..

그 외의 실험에는 저는 Perfusion 안합니다. 안하시고 신속히 Homogenize 하신 후, 당일날 바로 수술에 쓰실게 아니라면 -80도에 보관하는걸 권장합니다.

 

알2Conomy  |  05.30 16:28  

답변에 대한 댓글 같은게 될 줄 알았는데 안되는군요.

Lysate를 다른 쥐의 머리에 주입하는 것이 맞습니다.

Centrifuge 이후 Supernatant만 따로 보관할 때 혈청과 혈구가 분리되는지 알고 싶었습니다.

 

답변 주신 분들 모두 감사드립니다!

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