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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 전체 > Molecular Biology-RNA > etc.
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질문 cDNA 합성 후 qPCR을 돌렸는데 문제가 있는걸까요? 조언좀 부탁드립니다.
알놀고싶다(대학원생)  | 05.10 21:52

안녕하세요. 저는 cDNA합성후에 qPCR을 돌려서 유전자 발현 차이를 확인하는 실험을 하고 있습니다. 이번에 qPCR을 돌린후 Ct값을 보고 궁금한게 있어서 질문하게 됐습니다.

일단 저는 동물의 근육조직에서 RNA를 추출하고 cDNA를 합성했습니다. 그후에 qPCR을 돌렸는데요, 보통 qPCR을 할때 하나의 샘플(한개 튜브) 에서 triplet으로 qPCR을 돌려서 오차값을 확인하면서 실험을 했었습니다.

그런데 이번에는 그렇게 하지 않고 처음에 조직을 떼어낼때 같은조직을 세번 떼어 낸 후에 농도를 맞춰서 cDNA를 합성하고 qPCR을 진행했습니다.

저는 모든 샘플의 농도를 일정하게 맞춰서 cDNA를 합성했고, cDNA합성 후에 또 농도를 일정하게 맞춰서 qPCR을 진행했는데, 그러면 같은 조직 3개에서 housekeeping gene의 Ct값이 이론적으로 유사하게 나와야하는게 맞는건지요?

예를들어

쥐의 근육조직-1, 근육조직-2, 근육조직-3(다 같은조직) 에서 housekeeping gene의 Ct값이 각각 22, 26, 21 이런식으로 나왔다면 cDNA합성과정중에 문제가 있었을 가능성이 있나요?

#cDNA
 
#qPCR
 
#housekeeping gene
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리닥눈삼  |  05.11 01:25  

같은 조직을 샘플링 하였다고 해도 독립된 세 번의 샘플링 작업이므로 똑같은 반응을 기대하긴 어렵습니다. 그래서 housekeeping gene을 같이 걸어줍니다.

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