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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 웨스턴 블랏 로딩 할 때 질문이 있습니다
뒷다리쥬뗌므(대학생)  | 05.10 19:44

Protein 정량 후에 단백질, DW, 5X Sample buffer를 정해진 양에 맞추어서 분명히 넣고 voltex를 한 후 100도씨에 5분 가량 끓입니다. 
그 이후에 ice위에서 cooling 한 후 (또는 냉장고에 놔두기도 합니다) centrifuge로 spin down을 살짝한 후 로딩을 하면 예를 들어 볼륨을 30 ul 으로 잡아서 만들었는데 28 ul 정도로 볼륨이 적게 있거나 볼륨이 30 그대로 있는 샘플도 있고 도대체 문제가 무엇인지 모르겠습니다 ㅜㅜ 

#western blot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
456  |  05.10 19:56   

1) boiling하는과정에서 물 증발

2) sample buffer가 조금 적게 들어갔거나 더들어갔거나

뒷다리쥬뗌므  |  05.10 22:37  
Buffer를 정확하게 2nd stop까지 해서 넣었는거 같은데 제 손이 문제일까요? ㅜㅜ
123  |  05.11 08:58   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

pipette error

순수 물이 아닌 이상 파이펫 팁에 묻는 loss는 어쩔 수 없습니다.

spin down 살짝 해도 작은 방울은 모이지 않을겁니다. (4'C centrifuge 5분 정도 하면 모일까요)

대왕개구리SPEED  |  05.11 10:06  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 13k, 5분 정도 해 보세요.

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