제가 클로닝을 처음 시도해보고 있는데 궁금한 것이 몇가지 있습니다..
1. 총 세가지 유전자를 클로닝해야하고 원래 크로모좀에는 이 세 유전자(a,b,c)가 한 방향으로 전사가 됩니다. 하지만 a와 b사이에는 약 100bp의 intergenic region이 있고, 논문을 찾아본 결과 bc는 operon으로 발현한다는 것 같습니다.
그래서 a,b,c가 한 operon이 아닐 가능성이 높은데
여기서 a,b,c를 한번에 잘라서 vector에 삽입하고 발현시키는게 가능한가요...? abc가 한 operon이 아니어도, a의 promoter가 어디있는지 모르니 a 위에 200bp정도부터 잘라서 c의 종결코돈까지 잘라서 넣으면 발현이 제대로 될지 모르겠습니다 ㅠㅠ 알려주세요..
2. 그리고 보통은 유전자 사이에 rbs를 넣어주는 것 같던데 그렇게 안해도 발현은 가능한 거죠..?
*참고로 저는 과발현이 목적이 아니고 간단하게 이 protein이 항생작용을 하는지 확인하고자 native chromosome에서보다 조금 더 발현을 시키는 것이 목적입니다.
제발 도와주세요 ㅠㅠㅠㅠㅠ
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