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질문 sds
올챙이ziw(대학원생)  | 2022.04.23 05:38
단백질 정량시 약 150ug/ml농도임을 확인하고
sds를 내렸는데 레더는 보이나 샘플에서 밴드가 전혀 보이지 않습니다 ㅠ 어떤 이유가 있을까요..?

단백질 추출 과정에서 마지막에 메탄올에 녹인 뒤 원하는 농도로 맞추기 위해 50도 오븐에서 몇시간 메탄올을 날렸습니다.
이후 동량의 증류수를 첨가하여 50% meoh에 단백질이 녹은 상태가 됐습니다.

이 샘플을 정량한 결과 150이 나왔습니다.

이 샘플을 로딩하게되면 메탄올이 들어있어 로딩이 되지 않으므로 해당 샘플을 질소가스로 날려서 물만 남긴 뒤에 (이상하게 물이 든 양보다 많이 작게 남았습니다. 물도 같이 날라갈 수도 있나요? ㅠㅠㅠ) 날린 양만큼 dmso를 넣고 샘플 버퍼와 섞어 로딩했습니다.

(검출하고자 하는 단백질은 meoh과 dmso에 녹습니다)

혹시 단백질 추출시 50도 오븐에 몇시간 둔 것이 문제가 될 수도 있을까요? 하지만 브레드포드 정량시 150이나 검출됐는데 sds에 전혀 뜨지 않는 게 이상합니다 ㅠ
아니면 메탄올을 날리고 dmso를 첨가하는 과정에 뭔가 문제가 있나요?

제발 도와주세요 ㅠㅠㅠㅠ

#sds-page
 
#protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2022.04.23   
분자량이 얼마인가요?
올챙이ziw  |  2022.04.23   
타겟은 약 20인데 정제를 안해서 그냥 전체 단백질이 나올것 같습니다. 밴드가 아예 안떠요ㅠㅠ
대왕개구리SPEED  |  2022.04.23   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- MeOH, DMSO에 녹으면 전기영동이 안될겁니다.

 

- 50% MeOH에는 녹나요?

 

- 20kda 단백질인데 물에 안녹는것은 확실한가요?

올챙이ziw  |  2022.04.26   

답이 늦어 죄송합니다 ㅠㅠ

 

- MeOH, DMSO에 녹으면 전기영동이 안될겁니다.

 

- 50% MeOH에는 녹나요?

:네 논문에서 그렇게 많이 녹이더라구요. methanol에 녹는 것 확실하고 50% 도 가능한 듯 합니다.

 

- 20kda 단백질인데 물에 안녹는것은 확실한가요?

 

잘못말씀드렸는데 20kda아니고 5kDa이더라구요. 물에 안녹는게 확실한지는 모르겠습니다. 밝혀진 단백질은 아니고 가장 유사한 같은 종류에 속하는 단백질은 보통 물보다는 dmso나 meoh에 녹았습니다.

 

그런데 meoh, dmso에 녹는 단백질이 왜 전기영동이 안되는건가요? 이유 설명해주시면 정말 감사하겠습니다 ㅠㅠㅠ

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